[發明專利]一株針對豬δ冠狀病毒S1蛋白構象表位的中和性單克隆抗體

有效

• 申請號: 202211618625.5
• 申請日: 2022-12-15
• 公開（公告）號: CN116253798B
• 公開（公告）日: 2023-10-27
• 發明（設計）人: 方六榮;廖樹森;肖少波;安楠;潘永光;劉詩雨;夏思進;周艷榮;方譜縣
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;C12N5/20;A61K39/42;A61P31/14;A61P11/00;G01N33/577;G01N33/569;C12R1/91
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 張立強

本發明屬于免疫學領域，涉及一株針對豬δ冠狀病毒S1蛋白構象表位的中和性單克隆抗體和分泌該單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用。中和性單克隆抗體的重鏈可變區包括氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3所示的CDR1、CDR2和CDR3；輕鏈可變區包括氨基酸序列如SEQ?ID?NO:4、RAS、SEQ?ID?NO:5所示的CDR1、CDR2和CDR3。分泌該中和性單克隆抗體的雜交瘤細胞株的保藏編號為CCTCC?NO：C2022248。本發明的單克隆抗體具有治療和預防豬δ冠狀病毒感染豬的臨床效果，也可用于制備豬δ冠狀病毒檢測試劑或者試劑盒。

技術領域

本發明屬于免疫學領域，具體涉及一株針對豬δ冠狀病毒S1蛋白構象表位的中和性單克隆抗體和分泌該單克隆抗體的雜交瘤細胞株及其應用。

背景技術

豬δ冠狀病毒(Porcine?deltacoronavirus，PDCoV)是一種新發現的腸道冠狀病毒，屬于冠狀病毒科δ冠狀病毒屬成員，主要引起新生仔豬嘔吐、腹瀉、脫水和死亡。臨床癥狀與豬流行性腹瀉(Porcine?epidemic?diarrhea，PED)和豬傳染性胃腸炎(Porcinetransmissible?gastroenteritis，TGE)相似。迄今為止，全球已有10多個國家或地區報道了PDCoV的發生與流行，對養豬業構成巨大威脅，而且PDCoV還具有跨物種傳播的潛力，可以感染雞、火雞、牛、小鼠甚至人類，具有重要的公共衛生意義和基礎研究價值。

PDCoV呈球形，直徑為60nm～180nm。病毒粒子有囊膜，囊膜表面有Spike(S)蛋白形成的棒狀纖突。核衣殼呈螺旋對稱，由蛋白質衣殼包裹單股RNA基因組形成，位于病毒粒子的中心(Ma?Y?M,Zhang?Y,Liang?X?Y,et?al.2015.Origin,evolution,and?virulence?ofporcine?deltacoronaviruses?in?the?United?States.mBio,6(2):e00064.)。病毒粒子包含4個主要的結構蛋白：纖突蛋白S、小膜蛋白E、膜蛋白M和衣殼蛋白N，其中S蛋白、E蛋白和M蛋白與脂質雙層共同構成病毒的囊膜，N蛋白構成病毒的衣殼。PDCoV基因組全長約為25.4kb，在5′端有帽子結構和非編碼區(5′UTR)，3′端有poly(A)尾和3′UTR?；蚪M包含至少9個開放閱讀框(open?reading?frame,ORF)，由5′端至3′端的排列順序為ORF1a、ORF1b、S、E、M、NS6、N、NS7、NS7a，共編碼15個成熟的非結構蛋白(nsp2～nsp16)、4個結構蛋白(纖突蛋白S、小膜蛋白E、膜蛋白M和核衣殼蛋白N)和3個輔助蛋白(NS6、NS7和NS7a)。編碼輔助蛋白NS6的基因位于M基因和N基因之間，NS7基因位于N基因內部，NS7a基因位于NS7基因C端(Fang?P?X,Fang?L?R,Hong?Y?Y,et?al.2017.Discovery?of?a?novel?accessory?proteinNS7a?encoded?by?porcine?deltacoronavirus.J?Gen?Virol,98(2):173-178.；Woo?P?C,Lau?S?K,Lam?C?S,et?al.2012.Discovery?of?seven?novel?Mammalian?and?aviancoronaviruses?in?the?genus?deltacoronavirus?supports?bat?coronaviruses?as?thegene?source?of?alphacoronavirus?and?betacoronavirus?and?avian?coronavirusesas?the?gene?source?of?gammacoronavirus?and?deltacoronavirus.J?Virol,86(7):3995-4008.)。PDCoV的S蛋白屬于I型膜蛋白，在病毒囊膜表面以三聚體形式存在，形成病毒的纖突，其主要功能是識別受體，介導病毒進入宿主細胞，對病毒的宿主范圍和組織嗜性起決定性作用，同時也是誘導中和抗體產生的主要蛋白。