[發明專利]一種膠體金-二氧化硅復合微球的制備方法

在審

• 申請號: 202211613809.2
• 申請日: 2022-12-15
• 公開（公告）號: CN115837255A
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 李冰;王佳
• 申請（專利權）人: 鄭州凌思生物科技有限責任公司
• 主分類號: B01J13/02
• 分類號: B01J13/02;G01N33/531;G01N33/543
• 代理公司: 廣州海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 馬赟齋

本發明公開了一種膠體金?二氧化硅復合微球，包括表面官能化的膠體金納米微球與表面官能化的二氧化硅微球之間的表面官能團共價偶聯組裝成復合微球，其中所述表面官能化的膠體金納米微球位于所述表面官能化的二氧化硅微球的表面。本發明還公開了膠體金?二氧化硅復合微球的制備方法：以小粒徑的納米金顆粒為種子金，滴加氯金酸和含巰基的羧酸還原劑，通過逐步生長的方法制備表面帶羧基的膠體金顆粒，即羧基膠體金顆粒；二氧化硅微球在堿性條件下使用帶有氨基的硅烷偶聯劑進行修飾得到表面帶有氨基的二氧化硅微球；將羧基膠體金顆粒經偶聯劑活化后，與帶有氨基的二氧化硅微球進行偶聯，離心分離，復溶，得到納米膠體金?二氧化硅復合微球。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，具體涉及一種膠體金-二氧化硅復合微球的制備方法。

背景技術

納米復合微球的種類繁多，可用在不同的領域中。在IVD中，側向層析技術已經發展多年，而以膠體金為代表的檢測仍存在一些問題，如金標復合物在層析涌動過程中穩定性比較差，會產生分離，引起假陽或信號顯色淺的問題。而在側向層析方向，可用膠體金-二氧化硅復合微球作為載體材料，增大微球的粒徑，提高檢測靈敏度。

納米二氧化硅微球為無定型白色粉末，無毒無味無污染，具有粒徑小、純度高、比表面積大、分散性能好等特點，并憑借其優越的穩定性及生物惰性、補強性、觸變性和光學及機械性能，廣泛應用于吸附、標記、示蹤、檢測、體內成像、免疫醫學、高通量藥物篩選等領域。

在IVD領域，膠體金檢測具有方便快捷、不需要特殊設備和試劑，且結果判斷直觀等特點，因而適合于廣大基層檢驗人員，具有巨大的發展潛力和廣闊的應用前景。然而，在以膠體金為載體的側向層析檢測中，定量以及靈敏度低的問題一直困擾著各大體外診斷試劑盒研發廠家。目前，既能實現定性簡單易判讀又能輔助提升靈敏度，同時實現定量的固相載體材料市場上是沒有的。

發明內容

本發明的目的是提供一種膠體金-二氧化硅復合微球，作為側向層析固相載體，既保留了膠體金顯色特性，能夠使結果判斷直觀的特點，同時又解決了金標復合物在層析涌動過程中穩定性比較差，會產生分離，引起假陽或信號顯色淺等問題。

具體地，膠體金-二氧化硅復合微球，包括表面官能化的膠體金納米微球與表面官能化的二氧化硅微球，膠體金納米微球與二氧化硅微球之間的表面官能團共價偶聯組裝成復合微球，其中膠體金納米微球位于二氧化硅微球的表面。復合微球為納米微球與二氧化硅微球的共價偶聯物，其結構是二氧化硅母球上偶聯膠體金子球，即膠體金納米微球偶聯在二氧化硅微球表面，保留膠體金納米微球的顯色特征；同時因膠體金球與二氧化硅微球表面均具有官能團，在復合微球表面分布有修飾基團，可以與生物活材偶聯反應，可以用于IVD領域中，作為側向層析的固相載體材料。膠體金-二氧化硅復合微球粒徑增大且顏色無明顯變化，提高檢測靈敏度；膠體金表面的官能團與抗體或蛋白偶聯，從而增加金標結合物的穩定性。

膠體金納米微球表面官能團為羧基和巰基等。在一個實施例中，采用含巰基的羧酸還原劑對膠體金納米微球進行表面修飾。所述含巰基的羧酸還原劑包括巰基丁二酸、巰基丙酸或巰基乙酸。

二氧化硅微球表面官能為氨基。在一個實施例中，采用帶氨基的硅烷偶聯劑對二氧化硅微球進行表面修飾。所述帶氨基的硅烷偶聯劑包括3-氨基丙基三甲氧基硅烷、N-氨乙基-γ-氨丙基三乙氧基硅烷、3-氨基丙基二甲基乙氧基硅烷或氨基丙基三乙氧基硅烷。

本發明的另一個目的是提供一種膠體金-二氧化硅復合微球的制備方法，通過Au-S配位鍵得到表面含有羧基的金納米顆粒，通過偶聯劑活化表面羧基進一步與表面帶有氨基的二氧化硅球偶聯，得到膠體金-二氧化硅復合微球。

具體地，膠體金-二氧化硅復合微球的制備方法，包括以下步驟：

(1)膠體金表面修飾：以小粒徑的納米金顆粒為種子金，滴加氯金酸和含巰基的羧酸還原劑，通過逐步生長的方法制備表面帶羧基的膠體金顆粒，即羧基膠體金顆粒；

(2)二氧化硅微球表面修飾：二氧化硅微球在堿性條件下使用帶有氨基的硅烷偶聯劑進行修飾得到表面帶有氨基的二氧化硅微球；