[發明專利]小麥-長穗偃麥草抗莖基腐病短片段易位系的創制方法及其應用

在審

• 申請號: 202211603429.0
• 申請日: 2022-12-13
• 公開（公告）號: CN115843677A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 孔令讓;李學峰;宣宇;李冬
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/04;A01H1/00;C12Q1/6895;C12Q1/6841;C12N15/11
• 代理公司: 北京中知慧專利代理事務所(普通合伙) 11969
• 代理人: 卜愛華

1.一種小麥-長穗偃麥草抗莖基腐病短片段易位系的創制方法，其特征在于步驟如下：

(1)以攜帶Fhb7的小麥-長穗偃麥草短片段易位系SDAU2028為父本，以中國春ph1b突變體CS ph1b為母本，雜交獲得F₁；

(2)F₁與CS ph1b回交，從BC₁F₁代植株中提取基因組DNA，利用ph1b基因的特異分子標記Xpsr128、Xpsr574和XAWJL3以及與Fhb7緊密連鎖的7el₂特異分子標記Xcfa2240和XsdauK66進行檢測；篩選到ph1b基因純合而Fhb7基因雜合的單株，這些單株自交后獲得若干BC₁F₂代植株并全部提取基因組DNA；

(3)利用上述與Fhb7緊密連鎖的7el₂特異分子標記Xcfa2240以及PSY-E2的功能標記K-PSY對BC₁F₂代植株進行基因分型，篩選攜帶長穗偃麥草抗莖基腐病基因Fhb7而不含黃色素基因PSY-E2的小麥-長穗偃麥草短片段易位系，自交純合；

(4)PCR擴增反應產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳以及瓊脂糖凝膠電泳分析純合體的基因型；

(5)進行熒光原位雜交鑒定。

2.根據權利要求1所述易位系的創制方法，其特征在于，

步驟(2)中所述分子標記如下：

Xpsr128，正向引物P1，序列為SEQ ID NO.1；反向引物P2，序列為SEQ ID NO.2；

Xpsr574，正向引物P3，序列為SEQ ID NO.3；反向引物P4，序列為SEQ ID NO.4；

XAWJL3，正向引物P5，序列為SEQ ID NO.5；反向引物P6，序列為SEQ ID NO.6；

Xcfa2240，正向引物P7，序列為SEQ ID NO.7；反向引物P8，序列為SEQ ID NO.8；

XsdauK66，正向引物P9，序列為SEQ ID NO.9；反向引物P10，序列為SEQ ID NO.10；

步驟(3)中所述分子標記如下：

K-PSY，正向引物P11，序列為SEQ ID NO.11；反向引物P12，序列為SEQ ID NO.12。

3.權利要求1或2所述方法創制的含有小麥抗莖基腐病基因Fhb7的小麥-長穗偃麥草短片段易位系在小麥抗莖基腐病育種中的應用。

4.小麥-長穗偃麥草抗莖基腐病短片段易位系中與小麥抗莖基腐病基因Fhb7緊密連鎖的分子標記K-7396，其特征在于：其正向引物核苷酸序列如SEQ ID No.13所示；其反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.14所示。

5.權利要求4所述的分子標記K-7396在小麥抗莖基腐病育種中的應用。

6.權利要求4所述的分子標記K-7396在檢測目標株系是否攜帶Fhb7中的應用。

7.一種攜帶小麥抗莖基腐病基因Fhb7的遺傳改良系的創制方法，其特征在于：以權利要求1或2創制的小麥-長穗偃麥草短片段易位系為Fhb7的供體親本，以我國主栽小麥品種為輪回親本，連續回交2次后自交6次，并利用權利要求4所述的與Fhb7緊密連鎖的分子標記K-7396進行輔助選擇鑒定，保留攜帶Fhb7的單株；獲得了遺傳改良系。

8.權利要求6所述的遺傳改良系在小麥抗莖基腐病育種中的應用。