[發(fā)明專利]一種高親和力結(jié)合TET(X)家族蛋白保守區(qū)的單克隆抗體及其應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2022-12-09
• 公開（公告）號: CN116284414B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王和平;王文建;李莉;胡倩;禹定樂
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市兒童醫(yī)院
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N15/11;C12N9/02;G01N33/573;G01N33/577
• 代理公司: 北京鑫瑞森知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11961
• 代理人: 史云聰

本發(fā)明提供了一種高親和力結(jié)合TET(X)家族蛋白保守區(qū)的單克隆抗體及其應(yīng)用，屬于單克隆抗體技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明首先人工合成核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的截短型TET(X)抗原，然后誘導(dǎo)、表達(dá)、純化獲得抗原蛋白，接著使用該抗原蛋白進(jìn)行動物免疫，最終獲得重鏈Fd段核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示，氨基酸序列如SEQ?ID?NO.17所示，輕鏈核苷酸序列如SEQ?ID?NO.10所示，氨基酸序列如SEQ?ID?NO.18所示的單克隆抗體。本發(fā)明中的單抗與TET(X)蛋白親和力值高達(dá)1.5×10supgt;?10/supgt;nM，可有效應(yīng)用于替加環(huán)素抗藥性的快速檢測中。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于單克隆抗體技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種高親和力結(jié)合TET(X)家族蛋白保守區(qū)的單克隆抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

替加環(huán)素是第三代四環(huán)素家族的抗生素成員，常用于治療耐碳青霉稀類多重耐藥的革蘭陰性菌，被認(rèn)為是抗生素的“最后一道防線”。TET(X)家族是一類單加氧酶，目前已發(fā)現(xiàn)有14個成員，TET(X)家族成員之間的氨基酸序列相似性可高達(dá)80％。TET(X)家族不僅對四環(huán)素家族的全部抗生素具有較強(qiáng)的水解活性，而且是近年來發(fā)現(xiàn)了可以通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)移的TET(X)家族成員基因，這可能會造成此基因在臨床細(xì)菌建播撒及替加環(huán)素抗性的蔓延，導(dǎo)致臨床細(xì)菌耐藥性形勢發(fā)生惡化。TET(X2)是TET(X)家族中最早發(fā)現(xiàn)的成員之一，最早發(fā)現(xiàn)于黃桿菌科細(xì)菌的固有染色體基因組中。目前學(xué)術(shù)界認(rèn)為后來發(fā)現(xiàn)TET(X)家族的成員可能是由TET(X2)進(jìn)化而來。因此在臨床上快速檢測臨床菌株的TET(X2)對于臨床抗生素用藥及細(xì)菌耐藥性的防控具有重要意義。

目前，臨床微生物實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌耐藥性的常規(guī)檢測方法多為肉湯微量稀釋法、紙片法等，存在耗時長的缺點(diǎn)。因此，細(xì)菌耐藥性快速檢測新技術(shù)的研發(fā)已成為檢驗(yàn)與臨床關(guān)注的焦點(diǎn)。針對病原微生物耐藥性的快速檢測方法不斷涌現(xiàn)，如：基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOFMS)，光譜技術(shù)，電化學(xué)生物傳感器，綜合性分子診斷平臺，宏基因組測序等等。雖耗時短，但是這些方法存在費(fèi)用高昂，且對儀器設(shè)備及操作者要求過高的問題，因此，尚不容易普及，也難以及時指導(dǎo)抗感染治療。

相比之下，基于抗原-抗體反應(yīng)的快速檢測方法因具有敏感性高、特異性好，且檢測成本相對較低、對設(shè)備和操作者的技術(shù)要求相對較低等優(yōu)點(diǎn)，目前已經(jīng)在臨床上廣泛應(yīng)用，但是目前尚未有將該方法應(yīng)用于TET(X)蛋白檢測中的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種高親和力結(jié)合TET(X)家族蛋白保守區(qū)的單克隆抗體及其應(yīng)用。本發(fā)明首先人工合成核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示的截短型TET(X)抗原，然后誘導(dǎo)、表達(dá)、純化獲得抗原蛋白，接著使用該抗原蛋白進(jìn)行動物免疫，最終獲得重鏈Fd段核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示，氨基酸序列如SEQ?ID?NO.17所示，輕鏈核苷酸序列如SEQ?ID?NO.10所示，氨基酸序列如SEQ?ID?NO.18所示的單克隆抗體。本發(fā)明中的單抗與TET(X2)蛋白親和力值高達(dá)1.5×10^-10nM，可有效應(yīng)用于替加環(huán)素抗藥性的快速檢測中。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：