[發明專利]利用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析大承氣湯合煎和單煎差異性化學成分的方法

在審

• 申請號: 202211568741.0
• 申請日: 2022-12-08
• 公開（公告）號: CN115792021A
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 李養學;肖觀林;陳偉韜;畢曉黎;胥愛麗;李素梅;陳昭;江潔怡;張靖年
• 申請（專利權）人: 廣東省第二中醫院（廣東省中醫藥工程技術研究院）
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 東莞市興邦知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 44389
• 代理人: 杜梓嫻

本發明公開一種利用UPLC?Q?TOF?MS/MS分析大承氣湯合煎和單煎差異性化學成分的方法，其包括制備樣品溶液；將所述樣品溶液進行樣品中化學成分分析，質譜數據進行峰提取、峰匹配、峰識別以及歸一化等預處理，以將質譜數據轉換成包含保留時間、精確相對分子質量和峰強度的多元數據矩陣，將所述多元數據矩陣導入并進行多元統計分析；結合VIP及t檢驗，找到并鑒定出大承氣湯單煎、合煎凍干粉的差異性化學成分。本發明對大承氣湯合煎與單煎的差異性化學成分進行分析，快速評價單煎和合煎的化學一致性，并且結合多元統計分析，比較二者在化學成分方面的差異變化，為進一步傳統湯劑的改革及配方顆粒的科學合理應用提供研究基礎。

技術領域

本發明屬于中藥分析及中藥質量控制技術領域，具體涉及到一種利用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析大承氣湯合煎和單煎的差異性化學成分的方法，采用高分辨質譜技術分析大承氣湯合煎和單煎差異性化學成分的方法。

背景技術

大承氣湯由大黃、枳實、厚樸、芒硝4味藥組成，主治陽明腑實證、熱結旁流證，是瀉法的代表方劑，臨床療效顯著，廣泛用于治療急性胰腺炎。中藥傳統湯劑在我國是應用最早、最廣泛的劑型，可根據病癥加減方從而更好地發揮效果。中藥配方顆粒是單味原料藥材經提取、分離、濃縮等現代制藥技術制成，用于臨床上配制成湯劑。然而，自配方顆粒湯劑出現以來，越來越受到人們的關注，關于其療效的爭論仍在繼續，爭論的焦點是配方顆粒湯劑的化學成分可能與傳統湯劑的化學成分不同，在煎煮組合方劑的過程中可能存在化學相互作用，這也是配方顆粒湯劑與傳統復方湯劑等效性的重要問題?；诖?，本發明采用UPLC-Q-TOF-MS/MS法對大承氣湯合煎與單煎的差異性化學成分進行分析，快速評價單煎和合煎的化學一致性，并結合多元統計分析，比較二者在化學成分方面的差異變化，為進一步傳統湯劑的改革及配方顆粒的科學合理應用提供研究基礎。

發明內容

為了克服上述技術問題，本發明公開了一種利用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析大承氣湯合煎和單煎差異性化學成分的方法。

本發明為實現上述目的所采用的技術方案是：

一種利用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析大承氣湯合煎和單煎差異性化學成分的方法，所述方法包括：

步驟1，樣品溶液的制備：取大承氣湯單煎、合煎混合凍干粉，采用甲醇超聲提取，離心過濾后得樣品溶液；

步驟2，差異性化學成分的分析：將所述樣品溶液利用超高效液相色譜-四極桿-飛行時間高分辨質譜UPLC-Q-TOF-MS/MS進行樣品中化學成分分析，質譜數據通過采用MarkerView Version1.2.1,SCIEX進行峰提取、峰匹配、峰識別以及歸一化等預處理，以將質譜數據轉換成包含保留時間、精確相對分子質量和峰強度的多元數據矩陣，將所述多元數據矩陣導入MetaboAnalyst 5.0以及SIMCA-P 14.1軟件進行多元統計分析；

步驟3，差異性化學成分的鑒定：結合VIP及t檢驗，找到并鑒定出大承氣湯單煎、合煎凍干粉的差異性化學成分。

上述的利用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析大承氣湯合煎和單煎差異性化學成分的方法，其中所述步驟1的具體方法包括：精密稱取各批次的大承氣湯合煎、單煎凍干粉末各0.2g于50ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，于常溫下超聲提取30min，放冷，搖勻，以13000r·min^-1的轉速離心10min，取適量上清液，過0.22μm微孔濾膜，置于樣品瓶中，即得所述樣品溶液。

上述的利用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析大承氣湯合煎和單煎差異性化學成分的方法，其中在所述步驟2中，色譜條件為：采用AB SCIEX Exion LC超高效液相色譜儀，色譜柱為Waters UPLC BEH C18色譜柱2.1mm×100mm，1.7μm，以乙腈為流動相A，0.1％甲酸水溶液為流動相B，梯度洗脫，流速為0.3mL·min-1，柱溫為40℃，進樣量為1μL；