[發明專利]一種載藥用多孔碳酸鈣微球的合成方法

在審

• 申請號: 202211567855.3
• 申請日: 2022-12-07
• 公開（公告）號: CN115779096A
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 莫福旺;高友君;林妹;董文霞;張曉輝;高賓;鄧恩威
• 申請（專利權）人: 賀州學院;賀州市自然資源局
• 主分類號: A61K47/02
• 分類號: A61K47/02;A61K47/22;A61K31/704;A61P35/00;C01F11/18
• 代理公司: 北京智行陽光知識產權代理事務所(普通合伙) 11738
• 代理人: 范斌

1.一種載藥用多孔碳酸鈣微球的合成方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

a.稱取一定量的分析純CaCl₂和Na₂CO₃，分別將藥品置于燒杯中，再分別稱取相同質量的分析純葉酸粉末分別置于上述兩個燒杯中，再分別加入相同體積的去離子水，超聲分散10分鐘，然后將含有Na₂CO₃和葉酸的水溶液迅速倒入含有CaCl₂和葉酸水溶液的燒杯中，振蕩混合均勻，靜置反應30分鐘。然后將混合液轉入聚四氟乙烯反應釜，200℃反應12小時，自然冷卻后取出常壓過濾，濾渣用去離子水洗滌三次，用乙醇洗滌三次，80℃烘干12小時得到前驅體混合物；

b.將步驟a前驅體混合取出，置于瑪瑙研缽中研磨均勻，研磨時間5分鐘。將研磨之后的前驅體置于剛玉坩堝中，放入馬弗爐中，在空氣氛圍下，500～750℃煅燒反應1-5小時，冷卻至室溫后，取出研磨均勻，得到多孔碳酸鈣微球；

c.將步驟b制備的碳酸鈣微球用20mL甲苯超聲波分散攪拌1小時，加入2mL十六烷基溴化銨，攪拌0.5小時，過濾，醇洗3次，60℃烘干得到氨基化中空碳酸鈣微球，將上述氨基化中空碳酸鈣微球用35mL N,N-二甲基甲酰胺超聲波分散5分鐘后加入5mL的丁二酸酐的DMF溶液(0.9g丁二酸酐加入5mL N,N-二甲基甲酰胺)，再加入0.9mL三乙醇胺攪拌24小時，離心過濾，醇洗，60℃干燥得到羧基化中空碳酸鈣微球，將上述樣品再用20mL N,N-二甲基甲酰胺超聲波分散5分鐘，加32mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，再加20mL的N-羥基琥珀酰亞胺攪拌0.5小時，然后加入3mL 0.1mg/mL的聚乙烯亞胺溶液，繼續攪拌5小時，離心，水洗和醇洗，最后60℃干燥得到樣品。再將樣品于氧化型谷胱甘肽溶液(含60mg氧化型谷胱甘肽的水溶液)中超聲波分散5分鐘，攪拌12小時，過濾，最后30℃干燥得得到用于載藥的改性多孔碳酸鈣微球；

d.分別配制10mg/L、20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L的鹽酸阿霉素緩沖溶液(pH＝7.4),利用紫外可見分光光度計測試溶液在480nm處的吸光度，繪制標準曲線；

e.取0.0558g步驟c制備的中空碳酸鈣微球用10mL 1mg/mL的DOX緩沖溶液(pH＝7.4)在37℃，100r/min水浴搖床處理24小時，離心，水洗，干燥得到中空碳酸鈣微球載藥體并收集上清液，利用紫外可見分光光度計測試上清液在480nm處的吸光度，可以根據DOX標準溶液曲線計算載體載藥量；

f.取5mL PBS(磷酸緩沖溶液)緩沖溶液(pH＝7.4)加入30mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和40mg N-羥基琥珀酰亞胺，將負載了DOX藥品的多孔碳酸鈣分散于其中攪拌30分鐘，再加入加經過EDC和N-羥基琥珀酰亞胺活化的透明質酸，繼續攪拌，離心水洗，30℃干燥，得到經過透明質酸封堵的藥物載體多孔碳酸鈣；

g.取0.0100g經過封堵修飾的藥物載體CaCO₃分散在10mL的PBS緩沖溶液中(pH＝5.8)，將溶液置于4000mW規格的透析袋中，在50mL不同濃度還原型谷胱甘酸緩沖溶液(pH＝5.8)中，在36.8℃，100r/min水浴搖床處理，每間隔4小時從透析袋外溶液中取出1mL緩釋溶液(隨后補充等量新緩釋液)在480nm下利用紫外可見分光光度計測其吸光度。

2.如權利要求1所述的一種載藥用多孔碳酸鈣微球的合成方法，其特征在于，步驟a中所述的200℃反應12小時進行前驅體合成，其加熱制度為100℃→1h→200℃→12h→結束。

3.如權利要求1所述的一種載藥用多孔碳酸鈣微球的合成方法，其特征在于，步驟b中所述的氣氛為空氣氣氛。

4.如權利要求1所述的一種載藥用多孔碳酸鈣微球的合成方法，其特征在于步驟c所述氨基化試劑是十六烷基溴化銨，羧基化試劑是丁二酸酐，包封劑為聚乙烯亞胺。

5.如權利要求1所述的一種載藥用多孔碳酸鈣微球的合成方法，其特征在于步驟e所述裝載藥物為鹽酸阿霉素(DOX)。