[發明專利]一種精漿標志代謝物的篩選方法及在中重度弱精子癥診斷中的應用

在審

• 申請號: 202211564828.0
• 申請日: 2022-12-07
• 公開（公告）號: CN115792019A
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 韓寶泉;王濱;孫中義;王穎;鄭旭娟;熊娟
• 申請（專利權）人: 深圳大學總醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 深圳市深可信專利代理有限公司 44599
• 代理人: 劉昌剛

本發明涉及精漿標志代謝物技術領域，具體涉及一種精漿標志代謝物的篩選方法及在中重度弱精子癥診斷中的應用。本申請提供的一種精漿標志代謝物的篩選方法，包括以下步驟：按精子PR值的大小收集精液樣本，完成精液樣本收集后，對精液樣本中的精子和精漿進行分離，得到精漿樣品；將候選差異代謝物集合和關鍵差異代謝物集合進行對比分析，篩選得到與中重度弱精子癥發生密切相關的標志代謝物。本申請通過利用代謝組學多方法聯合分析從人的精漿中篩選出一種可用于中重度弱精子癥診斷用的標志代謝物，為中重度弱精子癥的診斷提供了一種直接有效的方式。

技術領域

本發明涉及精漿標志代謝物技術領域，具體涉及一種精漿標志代謝物的篩選方法及在中重度弱精子癥診斷中的應用。

背景技術

目前，世界范圍內不孕不育率高達15％(Fakhro et al.,2018)，不育癥已經成為繼癌癥和心腦血管疾病之外的第三大疾病，其中男性因素導致的不育約占一半(Agarwalet al.,2015)。隨著男性不育癥患者的不斷增加，男性不育已成為一個日益引起臨床重視的重大健康問題。弱精子癥是導致男性不育的一個常見原因，其特點是精子運動能力降低，精子活力下降(Shahrokhi et al.,2020)。根據世衛組織2010年的指導方針，臨床上將精子樣本總能動性40％和漸進能動性32％的患者定義為弱精子癥。其中，中重度弱精子癥導致的男性不育患者呈現逐年遞增的趨勢，但目前仍缺乏有效手段來提高弱精子癥患者的生殖力。近年來，隨著代謝組學的興起，越來越多的研究聚焦于弱精子癥患者精漿代謝組的差異研究，已有報道表明精漿中含有豐富的代謝物，相關代謝組學研究證實弱精子癥患者與健康者的精漿代謝物成分存在顯著的差異(Xu et al.，2020)。然而，以上研究均未能將不同類型的弱精子癥患者進行精確的分組，且采用分析方法單一，這也顯著降低了研究結果的準確性。

綜合最近研究進展，精漿的代謝組具有極大的研究潛力，或可為弱精子癥的診斷提供一種新方向，因此本申請提供一種精漿標志代謝物的篩選方法及在中重度弱精子癥診斷中的應用。

發明內容

為了克服現有技術中存在的缺點和不足，本申請的目的在于提供一種與中重度弱精子癥發生密切相關的代謝物，并應用到中重度弱精子癥的診斷。本申請所述的篩選方法首先通過非靶向代謝組學對4類人群(正常組Healthy、輕度弱精子癥組MIA、中度弱精子癥組MOA、重度弱精子癥組SA)的精漿代謝組進行了描述分析，隨后采用差異分析與WGCNA分析相結合的方法篩選得到關鍵差異代謝物棕櫚酰胺，通過靶向代謝物定量檢測的方法對新收集的正常組和中重度弱精子癥組精漿樣品中棕櫚酰胺的含量進行了定量檢測，確認棕櫚酰胺在中重度弱精子癥組精漿中的下調。

本申請的目的通過下述技術方案實現：

一種精漿標志代謝物的篩選方法，包括以下步驟：

按精子PR值的大小收集精液樣本，完成精液樣本收集后，對精液樣本中的精子和精漿進行分離，得到精漿樣品；

對精漿樣品進行代謝組測定；

對所述精漿的代謝組測定數據進行第一模型分析，篩選得到與中重度弱精子癥緊密相關的候選差異代謝物集合；

對與中重度弱精子癥緊密相關的關鍵差異代謝物，結合第二模型分析，得到與關鍵差異代謝物集合；

將候選差異代謝物集合和關鍵差異代謝物集合進行對比分析，篩選得到與中重度弱精子癥發生密切相關的標志代謝物。

進一步的，按精子PR值的大小收集精液樣本，完成精液樣本收集后，對精液樣本中的精子和精漿進行分離，得到精漿樣品，包括：按照WHO指導手冊，按精子PR值大小收集人的精漿樣品，完成精漿樣品收集后，采用梯度離心的方法對精子和精漿進行分離，得到精漿樣品。