[發明專利]一種基于SNP突變檢測技術鑒定雌鹿產品種源的引物組和試劑盒及其鑒定方法

在審

• 申請號: 202211549050.6
• 申請日: 2022-12-05
• 公開（公告）號: CN115820629A
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 管峰;俞可心;陳翔;姚逸安;胡情情;葛建;章書聲;劉雷雷
• 申請（專利權）人: 中國計量大學;舟山市食品藥品檢驗檢測研究院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6888;C12Q1/686
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 劉曉靜

1.一種基于SNP突變檢測技術鑒定雌鹿產品種源的引物組，其特征在于，包括上游外引物F68、上游內引物F403w1、下游內引物R450m6和下游外引物R615，所述上游外引物F68的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述上游內引物F403w1的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述下游內引物R450m6的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述下游外引物R615的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.一種基于SNP突變檢測技術鑒定雌鹿產品種源的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物組及檢測試劑。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑包括Taq酶、10×buffer、dNTP mixture、MgCl₂和ddH₂O。

4.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述上游外引物F68、上游內引物F403w1、下游內引物R450m6和下游外引物R615在PCR體系中的終濃度獨立為0.25μmol/L、0.25μmol/L、0.4μmol/L和0.25μmol/L。

5.一種利用權利要求1所述的引物組或權利要求2所述的試劑盒鑒定雌鹿產品種源的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取待檢測雌鹿產品基因組DNA；

(2)以步驟(1)提取到的基因組DNA為模板，利用權利要求1所述的引物組進行PCR擴增獲得擴增產物；

(3)對步驟(2)得到的擴增產物進行電泳檢測；當所述擴增產物有且僅有549bp和213bp兩個電泳條帶時，判定為純種梅花鹿；當擴增產物有且僅有549bp和383bp兩個電泳條帶時，判定為純種馬鹿；當擴增產物有且僅有549bp、213bp和383bp三個電泳條帶時，判定為花馬鹿雜交后代；當擴增產物僅有549bp一個電泳條帶時，判定為非馬鹿和梅花鹿之外的鹿品種。

6.根據權利要求5所述的鑒定雌鹿產品種源的方法，其特征在于，步驟(1)中所述待檢測雌鹿產品包括鹿肉、鹿血、鹿心、鹿腎、鹿筋、鹿尾、鹿胎盤和鹿胎粉。

7.根據權利要求5所述的鑒定雌鹿產品種源的方法，其特征在于，步驟(2)中所述PCR擴增的反應體系，以20μL計，包括以下組分：10×buffer2.0μL，25mmol/L的dNTP mixture 1.6μL，25mmol/L的MgCl₂2.0μL，10μmol/L的上游外引物F680.5μL，10μmol/L的上游內引物F403w10.5μL，10μmol/L的下游內引物R450m60.8μL，10μmol/L的下游外引物R6150.5μL，5U/μL的Taq酶0.4μL，模板DNA 3.0μL，ddH₂O 8.7μL。

8.根據權利要求5所述的鑒定雌鹿產品種源的方法，其特征在于，步驟(2)中所述PCR擴增的擴增程序為：95℃預變性5～10min；94℃變性30～50s，58～65℃退火35～60s，72℃延伸40～300s，變性、退火、延伸進行30～36個循環；72℃最終延伸5～12min。