[發明專利]一種鑒別天然煙堿和合成煙堿的液相色譜-串聯質譜分析方法

在審

• 申請號: 202211541700.2
• 申請日: 2022-12-03
• 公開（公告）號: CN115993411A
• 公開（公告）日: 2023-04-21
• 發明（設計）人: 付亞寧;崔利利;于捧捧;陳歡;王紅娟;田雨閃;韓書磊;劉彤;侯宏衛;胡清源
• 申請（專利權）人: 國家煙草質量監督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 黃宇亭

1.一種鑒別天然煙堿和合成煙堿的液相色譜-串聯質譜分析方法，首先采用超純水將煙草中的天然煙堿提取出來，合成煙堿直接使用超純水稀釋；隨后進行上樣，采用液相色譜將煙堿與萃取液中的其他雜質分開，利用液相色譜-串聯質譜檢測，其特征在于：通過對比煙堿的[M+H]⁺和[M+H+1]⁺峰的豐度和面積比，以及[M+H]⁺和[M+H+1]⁺峰作為母離子的碎片峰的同位素豐度比來驗證煙堿的來源或天然性；通過結合化學計量學的方法進一步構建天然與合成煙堿鑒別的評價模型，并篩選影響兩者差異的主要變量。

2.根據權利要求1所述的鑒別天然煙堿和合成煙堿的液相色譜-串聯質譜分析方法，其特征在于：具體步驟如下：

(1)煙堿提取：采用超純水溶液將煙草中的天然煙堿提取出來，并將合成煙堿進行稀釋；

(2)采用超高效液相色譜將煙堿和萃取液中的其他雜質分開；

(3)通過質譜分析，對比煙堿的[M+H]⁺和[M+H+1]⁺峰的豐度和面積比，以及[M+H]⁺和[M+H+1]⁺峰作為母離子的碎片峰的同位素豐度比來驗證煙堿的來源或天然性；

(4)通過結合化學計量學的方法構建天然與合成煙堿鑒別的OPLS-DA評價模型，并篩選影響兩者差異的主要變量。

3.根據權利要求2所述的鑒別天然煙堿和合成煙堿的液相色譜-串聯質譜分析方法，其特征在于：步驟(1)中的煙堿提取處理方式具體為：

天然煙堿：準確稱取0.01g的天然煙草制品，加入50mL的超純水，于30℃下超聲萃取20min，靜置過夜，取適量的萃取液過0.22μm水系濾膜；

合成煙堿：煙堿純品用水稀釋至20μg/mL。

4.根據權利要求2所述的鑒別天然煙堿和合成煙堿的液相色譜-串聯質譜分析方法，其特征在于：步驟(2)中的液相色譜條件為：

含有10mM甲酸銨，pH為3.5的水溶液作為流動相A；純乙腈作為流動相B；流速為0.4mL/min，在70％B條件下等度洗脫7min；色譜柱：ACQUITY?UPLC?BEH?HILIC，規格2.1×150mm,1.7μm，柱溫為40℃；進樣體積為2μL。

5.根據權利要求2所述的鑒別天然煙堿和合成煙堿的液相色譜-串聯質譜分析方法，其特征在于：步驟(3)中的質譜條件為：

離子源為電噴霧(electrospray?ionization，ESI)離子源，正離子模式下進行數據采集，碰撞氣體為氬氣；其毛細管的電壓、霧化器氣的壓力和干燥氣的溫度分別是-4.5kV、1.8bar和220℃；質譜內標為甲酸鈉溶液，m/z范圍為50-1300Th；隨后，分別對煙堿m/z為163和164進行MS/MS碎裂分析，且二級碎裂中碰撞能量(CID)為10eV；m/z為163的碎片離子為84和130，m/z為164的碎片離子為85和131。

6.根據權利要求2所述的鑒別天然煙堿和合成煙堿的液相色譜-串聯質譜分析方法，其特征在于：步驟(4)中的模型具體如下：

采用OPLS-DA樣品分類模型用于計量統計分析，由VIP值可以看出變量164-85/84和164-85/(84+85)可以代表天然煙堿樣本，而變量163-131/131和163-131/(130+131)代表合成煙堿樣本。