[發明專利]恩度敏感細胞株的構建及其在恩度測活中的應用

有效

• 申請號: 202211532905.4
• 申請日: 2022-12-02
• 公開（公告）號: CN115537403B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 秦璽;李山虎;安怡方;周勇;裴德寧;李響;史新昌;丁有學;畢華;于雷;黃芳;朱留強;王軍志
• 申請（專利權）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C12N15/12;C12Q1/02
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 高倩倩

本發明公開了恩度敏感細胞株的構建及其在恩度測活中的應用，本發明提供了一種構建Endostatin敏感細胞株的方法、一種檢測Endostatin活性的方法以及UTS2在構建Endostatin敏感細胞株中的應用。本發明提供的敏感細胞株及方法能夠更加敏感、穩定、高效的測定Endostatin的活性，具有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及恩度敏感細胞株的構建及其在恩度測活中的應用。

背景技術

血管內皮抑制素（Endostatin）是一種應用基因工程技術，將從小鼠內皮細胞系中分離得到的一種具有抑制血管內皮細胞作用的物質，用于治療或復治的Ⅲ/Ⅳ期非小細胞肺癌患者，是癌癥患者化療的輔助藥物。血管內皮抑制素為血管生成抑制類新生物制品，其作用機理是通過抑制形成血管的內皮細胞遷移來達到抑制腫瘤新生血管的生成，阻斷了腫瘤細胞的營養供給，從而達到抑制腫瘤增殖或轉移目的。

Endostatin活性測定是對藥物的有效成分和含量以及藥物效價的測定，是確保藥物有效性的重要質控指標。目前未見有效的針對于Endostatin活性測定的方法，本領域亟需一種能夠穩定高效測定Endostatin活性的方法。

發明內容

為彌補現有技術的不足，本發明構建了一種Endostatin敏感細胞株，建立一種更加敏感，穩定，高效的Endostatin活性測定方法。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面提供了一種構建Endostatin敏感細胞株的方法，所述方法包括敲低UTS2。

進一步，包括通過RNA干擾技術、同源重組技術、類轉錄激活效應子核酸酶技術、鋅指核酸酶技術、CRISPR技術敲低UTS2。

進一步，通過RNA干擾技術敲低UTS2。

進一步，RNA干擾技術進行敲低的靶序列如SEQ ID NO.3-5所示。

進一步，RNA干擾技術進行敲低的靶序列如SEQ ID NO. 5所示。

進一步，所述RNA干擾技術包括siRNA、shRNA、miRNA。

進一步，所述RNA干擾技術為shRNA。

進一步，所述Endostatin敏感細胞株選自內皮細胞。

進一步，所述內皮細胞選自血管內皮細胞。

進一步，所述血管內皮細胞包括靜脈內皮細胞、動脈內皮細胞。

進一步，所述血管內皮細胞選自靜脈內皮細胞。

進一步，所述靜脈內皮細胞包括臍靜脈內皮細胞、腦靜脈內皮細胞。

進一步，所述靜脈內皮細胞選自臍靜脈內皮細胞。

進一步，所述臍靜脈內皮細胞包括人類臍靜脈內皮細胞和非人類動物臍靜脈內皮細胞。

進一步，所述臍靜脈內皮細胞選自人臍靜脈內皮細胞。

本發明的第二方面提供了一種Endostatin敏感細胞株，所述Endostatin敏感細胞株通過本發明第一方面所述的方法構建而成。

本發明的第三方面提供了一種檢測Endostatin活性的方法，所述方法包括使用本發明第二方面所述的Endostatin敏感細胞株進行檢測。

進一步，所述方法還包括將Endostatin加入到Endostatin敏感細胞株中孵育，通過比色法檢測Endostatin的活性。

進一步，所述比色法包括MTT法、XTT法、CCK8法。