[發明專利]一種煙酰胺的制備方法在審
| 申請號： | 202211499098.0 | 申請日： | 2022-11-28 |
| 公開（公告）號： | CN115851846A | 公開（公告）日： | 2023-03-28 |
| 發明（設計）人： | 請求不公布姓名 | 申請（專利權）人： | 杭州唯鉑萊生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12P17/12 | 分類號： | C12P17/12;C12N1/20;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 郭蓮梅 |
| 地址： | 311100 浙江省杭州市*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 煙酰胺 制備 方法 | ||
1.一種煙酰胺的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
在工程菌的發酵液中流加天冬氨酸與甘油，通過發酵生成煙酰胺；
所述天冬氨酸的流加速率為5-30g/(L*h)，所述天冬氨酸與甘油的添加量的比例為0.5-2:1；
所述工程菌為能夠表達天冬酰胺合成酶、天冬氨酸氧化酶、喹啉酸合成酶和吡啶甲酸脫羧酶的菌株。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述天冬氨酸的流加速率為10-20g/(L*h)；
優選地，所述天冬氨酸的流加速率為12-15g/(L*h)。
3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述天冬氨酸與甘油的添加量的比例為0.9-1.5:1；
優選地，所述天冬氨酸與甘油的添加量的比例為0.9-1.1:1。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，在發酵過程中，所述天冬氨酸的添加總量為100-250g/L；
優選地，所述天冬氨酸的添加總量為165-175g/L。
5.根據權利要求1-4任一項所述的制備方法，其特征在于，發酵過程中的pH控制在5.5-8.0；
優選地，所述pH控制在6.5-7.0。
6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，發酵過程中的發酵溫度為25-35℃；
優選地，所述發酵溫度為28-30℃。
7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述工程菌為重組大腸桿菌，所述重組大腸桿菌中含有編碼天冬酰胺合成酶、天冬氨酸氧化酶、喹啉酸合成酶和吡啶甲酸脫羧酶的基因。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述工程菌的發酵液的制備方法：將所述工程菌的種子液接種至培養基中發酵，至發酵液中所述工程菌的濃度為OD600nm＝20時，加入誘導劑，即得所述工程菌的發酵液。
9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述培養基包括改良TB培養基；所述改良TB培養基的成分包括10-20g/L蛋白胨、20-30g/L酵母粉、5-15g/L甘油、1-5g/L磷酸二氫鉀和10-15g/L磷酸氫二鉀；
優選地，所述改良TB培養基的成分包括12g/L蛋白胨、24g/L酵母粉、10g/L甘油、2.31g/L磷酸二氫鉀和12.54g/L磷酸氫二鉀。
10.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述發酵的溫度為36-38℃，pH＝6.5-7.2；
優選地，所述誘導劑包括異丙基–β-D-半乳糖苷，所述誘導劑的濃度為0.1-1.0mM。
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