[發明專利]一種植物乳桿菌凍干保護劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202211470503.6
• 申請日: 2022-11-23
• 公開（公告）號: CN115678782A
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發明（設計）人: 夏寧;滕建文;馮雪寧;李祎;吳丹珠
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/20;C12R1/25
• 代理公司: 南寧市科典知識產權代理事務所(普通合伙) 45135
• 代理人: 謝正星

本發明公開了一種植物乳桿菌凍干保護劑及其制備方法和應用，包括方法如下步驟：將銀耳多糖溶液與酪蛋白溶液混合，進行濕熱接枝反應，即得。本發明利用銀耳多糖和蛋白質發生水熱反應生成具有兩親性的糖基化產物，該產物能降低益生菌菌體的損傷，顯著提高了長期處于低溫冷凍干燥條件下的植物乳桿菌的凍干存活率，解決了現有植物乳桿菌菌粉在冷凍干燥制備、貯藏過程中容易失活的問題，且克服了現有技術中凍干保護劑無法為植物乳桿菌恢復活力與增殖提供營養物質的難點。

技術領域

本發明屬于益生菌制劑技術領域，具體指一種富含銀耳多糖的植物乳桿菌凍干保護劑的制備。

背景技術

植物乳桿菌因其具有調節腸道菌群、緩解乳糖不耐癥、增強機體免疫力、降低膽固醇等益生作用，在食品、醫療等方面的應用日益廣泛，市場需求巨大。植物乳桿菌凍干粉主要通過真空冷凍干燥技術來生產，冷凍干燥過程一般會造成益生菌的細胞膜通透性改變、蛋白質變性失活、pH值被破壞、DNA損傷和膜脂肪酸組成發生改變等，菌液直接冷凍干燥存活率極低。因此，在益生菌制劑的生產過程中，為了保護益生菌的活性，除了控制凍干工藝制程外，最關鍵的是的挑選益生菌合適的凍干保護劑提高菌體存活率，此外，菌粉的后期儲藏穩定性也與凍干保護劑有著密切的關系，因此開發一種合適的植物乳桿菌凍干保護劑尤為重要。

銀耳多糖(Tremella polysaccharides，TPS)是一種真菌黏性多糖，目前已有報道證實具有益生活性。因其特殊的結構，有較高良好的成膜性和阻氧性等特性。植物乳桿菌為厭氧或兼性厭氧菌，銀耳多糖良好的成膜性可密切包裹菌株，其阻氧特性更有利于隔絕氧氣。且由于銀耳分子結構中含有葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸，屬于酸性多糖，可以與蛋白質發生復合反應，作為冷凍保護劑運用于凍干菌粉中。兩種大分子物質之間通過靜電作用和其他弱相互作用如疏水相互作用、范德華力、氫鍵作用等非共價結合。但由于銀耳多糖的分子質量較大，低濃度下就表現出很高的粘度，不易與菌液混合均勻，影響其在凍干過程對菌種的保護作用。因此，對銀耳多糖的結構進行適度的改性，并利用其與蛋白質的相互作用，構建一種具有促益生活性的菌種保護劑。在冷凍干燥過程中，減緩益生菌菌體內部結構破壞帶來的損傷，保證菌株存活率，提高凍干菌粉應用價值。

發明內容

本發明的目的在于解決現有冷凍干燥生產植物乳桿菌菌粉在生產制備、貯藏中容易失活的問題，且克服現有技術中益生菌凍干保護劑無法為植物乳桿菌恢復活力與增殖提供營養物質的難點，本發明提供了一種植物乳桿菌凍干保護劑及其應用，所使用的保護劑含有能夠促進植物乳桿菌增殖的銀耳多糖，同時利用改性后的銀耳多糖與酪蛋白相互作用生成的糖基化產物，有效提高植物乳桿菌凍干后的存活率。

本發明的目的是提供了一種凍干保護劑，本發明采取的技術方案為：

一種植物乳桿菌凍干保護劑的制備方法，包括以下步驟：將銀耳多糖溶液與酪蛋白溶液混合，進行濕熱接枝反應，即得。

進一步地，所述銀耳多糖溶液的制備方法為：取銀耳多糖加水配置成溶液，超聲處理，即得。

進一步地，所述超聲功率為240～480W，超聲溫度為30℃，超聲時間為2～10min。

進一步地，所述酪蛋白溶液的制備方法為：將酪蛋白溶解在pH7.0的PBS緩沖液中，攪拌使其充分溶解，即可。

進一步地，所述銀耳多糖溶液與所述酪蛋白溶液的質量濃度為4％，所述銀耳多糖溶液與酪蛋白溶液的混合比例為3:1～7:1。

進一步地，所述濕熱接枝反應的條件為：反應溫度為120℃，反應pH為7.0，反應時間為10～30min。

本發明所述的植物乳桿菌凍干保護劑在植物乳桿菌凍干粉制備中的應用，包括如下步驟：

(1)將植物乳桿菌活化，接種和擴大培養，得植物乳桿菌培養液，所述植物乳桿菌培養液離心，得到菌泥；所述菌泥洗滌后重懸于無菌蒸餾水中得到菌懸液備用；