[發明專利]利用褐藻膠裂解酶FaAly554制備褐藻寡糖的方法

在審

• 申請號: 202211466518.5
• 申請日: 2022-11-22
• 公開（公告）號: CN115873912A
• 公開（公告）日: 2023-03-31
• 發明（設計）人: 毛相朝;孟迪;姜宏;高昕;張朝輝
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C12P19/12
• 分類號: C12P19/12;C12P19/00;C12P19/04;C12N9/88;C12N15/60
• 代理公司: 濟南光啟專利代理事務所(普通合伙) 37292
• 代理人: 陳芳

本發明公開了一種利用褐藻膠裂解酶FaAly554制備褐藻寡糖的方法：采用褐藻膠裂解酶FaAly87降解海藻酸鈉，降解條件為：溫度30～40℃，pH 6.0～9.0，時間30分鐘以上；所述褐藻膠裂解酶FaAly554的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。所述褐藻膠裂解酶FaAly554的編碼基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發明的褐藻膠裂解酶FaAly554，屬于PL6家族，能夠降解海藻酸鈉。降解海藻酸鈉產生不飽和1?5糖，酶解主要產物為不飽和3?4糖，具有良好的生物催化效率。

技術領域

本發明涉及一種利用褐藻膠裂解酶FaAly554制備褐藻寡糖的方法，屬于功能酶技術領域。

背景技術

由褐藻膠降解產生的褐藻寡糖聚合度(DP)一般在2～20之間，分子量低，水溶性好，具有免疫調節、抗菌、抗氧化、抗高血壓、抗糖尿病、抗腫瘤、抗凝血等多種生理活性，在醫藥、保健品、食品、農業等領域得到了廣泛的應用。

褐藻寡糖的制備方法主要有化學法、物理法、生物酶法。化學法、物理法制備褐藻寡糖存在反應條件劇烈難控制、環境污染大、產物不可控且難分離、對寡糖結構有破壞等不足之處。生物酶法是用特異性或非特異性的褐藻膠裂解酶降解褐藻膠制備寡糖，具有反應條件溫和、反應過程容易控制、產物純度較高且易分離、獲得的寡糖具有不飽和雙鍵具備更好的生物活性等優點。但目前的褐藻膠裂解酶活力不高，降解效率低，難以滿足工業生產和應用的要求。

發明內容

針對上述現有技術，本發明提供了一種利用褐藻膠裂解酶FaAly554制備褐藻寡糖的方法，本發明采用褐藻膠裂解酶FaAly554降解褐藻制備褐藻寡糖，可長時間維持高酶活、降解效率高等優點。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種利用褐藻膠裂解酶FaAly554制備褐藻寡糖的方法：采用褐藻膠裂解酶FaAly554降解海藻酸鈉，降解條件為：溫度30～40℃，pH 6.0～9.0，時間30分鐘以上，可長達192小時，優選12小時；所述褐藻膠裂解酶FaAly554的氨基酸序列如下所示，如SEQ IDNO.1所示。

SEQ ID NO.1：

QVPADLIRNCKQWYITYPTGKNVNTICNEPSNEFYFVNKDKNAITFRVPIRSDNGTTPNTRNIRSELREKTADGKENIFWTTDGTHQIYVKQAITHLPLKHPQLVATQIHGDKAAGIDDAMVMRLEGKKLFLCFNGGKLHPNVMIKSDYVLGTVHEVIFKIVDGKHYCYYSEDGKLLSAYKNGTAERYLIKDGNNDFVMDKNYDKSYFKVGNYTQSNPTDEGDLTGDPNNYGEVVVYDFDVDHSGKGFTTAKSSK。

進一步地，所述降解的具體方式為：向海藻酸鈉溶液中加入含褐藻膠裂解酶FaAly554的酶液。

進一步地，所述褐藻膠裂解酶FaAly554的加酶量為0.33U/ml。

進一步地，所述海藻酸鈉溶液的濃度為2～10mg/ml，優選5mg/ml。

進一步地，所述降解條件為：溫度35℃，pH 7.0，時間30小時以內；或：溫度4℃或30℃，pH 7.0，時間168小時以內。

褐藻膠裂解酶FaAly554，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。其在降解褐藻或制備褐藻寡糖中的應用。

所的褐藻膠裂解酶FaAly554的編碼基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本發明的褐藻膠裂解酶FaAly554，屬于PL6家族，能夠降解海藻酸鈉。降解海藻酸鈉產生不飽和1-5糖，酶解主要產物為不飽和3-4糖，具有良好的生物催化效率。

本發明使用的各種術語和短語具有本領域技術人員公知的一般含義。