[發(fā)明專(zhuān)利]用于鑒定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的SSR分子標(biāo)記引物組合及方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211465723.X
• 申請(qǐng)日: 2022-11-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115927728A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫達(dá)鋒;方媛;華蓉;劉紹雄;李雪松;李建英;馬明;馮云利;劉春麗;尚陸娥
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中華全國(guó)供銷(xiāo)合作總社昆明食用菌研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 昆明知道專(zhuān)利事務(wù)所(特殊普通合伙企業(yè)) 53116
• 代理人: 鄧菁菁

本發(fā)明公開(kāi)了用于鑒定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的SSR分子標(biāo)記引物組合及方法，該SSR分子標(biāo)記引物組合包括MSSR029，MSSR036，MSSR041，MSSR092共4對(duì)SSR分子標(biāo)記引物?；谒鯯SR分子標(biāo)記引物組合鑒定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的方法，按以下步驟實(shí)現(xiàn)：首先提取待檢測(cè)六妹羊肚菌菌株的菌絲體基因組DNA，再用SSR分子標(biāo)記引物組合對(duì)DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增好的PCR產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)行熒光毛細(xì)管電泳檢測(cè)，比對(duì)熒光峰圖，即可鑒定出六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株。本發(fā)明提供的基于SSR分子標(biāo)記引物組合鑒定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的方法，可在菌絲階段對(duì)其進(jìn)行快速鑒別，避免經(jīng)過(guò)選育的優(yōu)良菌株在生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)和市場(chǎng)流通過(guò)程中與其它六妹羊肚菌菌株混雜，從而有效保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)，對(duì)羊肚菌生產(chǎn)過(guò)程中品種的真實(shí)性鑒定具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食用菌分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體涉及用于鑒定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的SSR分子標(biāo)記引物組合及方法。

背景技術(shù)

六妹羊肚菌（ Morchella?sextelata?M.?Kuo），隸屬子囊菌門(mén)Ascomycota、盤(pán)菌綱Pezizomycetes、盤(pán)菌目Pezizales，羊肚菌科Morchellaceae，是一種味道鮮美的食藥兼用真菌，具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。其子實(shí)體肉質(zhì)脆嫩，含有豐富的蛋白質(zhì)，多種維生素，鐵、鋅等多種礦質(zhì)元素，其獨(dú)特的風(fēng)味受到全球美食愛(ài)好者的青睞。

野生羊肚菌廣泛分布于世界各地，但資源非常有限。自1882年以來(lái)，人們一直致力于培養(yǎng)和馴化羊肚菌，主要以模擬自然環(huán)境出菇的仿生栽培為主。2000年后，隨著外源營(yíng)養(yǎng)袋技術(shù)的面世，羊肚菌栽培進(jìn)入規(guī)模化種植階段。近幾年羊肚菌的人工種植在國(guó)內(nèi)迅速擴(kuò)張，全國(guó)大部分地區(qū)均有栽培。目前在我國(guó)實(shí)現(xiàn)人工栽培的羊肚菌為黑色羊肚菌支系的梯棱羊肚菌（ M.?importuna）、六妹羊肚菌、七妹羊肚菌（ M.?eximia）、頭絲羊肚菌（ M.?exuberans）、歐式羊肚菌（ M.?oweri）、Mel-13（系統(tǒng)發(fā)育種）和Mel-21，其中主要的栽培物種為梯棱羊肚菌和六妹羊肚菌。

雖然羊肚菌已經(jīng)基本實(shí)現(xiàn)人工栽培，但是其瓶頸問(wèn)題依然存在。目前市場(chǎng)上的羊肚菌菌種雜亂，菌種名稱(chēng)混亂，菌種質(zhì)量參差不齊，是出菇不穩(wěn)定、產(chǎn)量低、重復(fù)性差等問(wèn)題出現(xiàn)的主要原因。篩選合適的分子標(biāo)記對(duì)羊肚菌栽培品種的準(zhǔn)確鑒定、知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)和新品種選育具有重要意義。

簡(jiǎn)單重復(fù)序列SSR（simple?sequence?repeat）是一類(lèi)由1-6個(gè)堿基組成的基本串聯(lián)重復(fù)核苷酸序列，也稱(chēng)微衛(wèi)星序列。SSR分子標(biāo)記是基于重復(fù)序列兩側(cè)特定的保守序列設(shè)計(jì)引物，來(lái)擴(kuò)增檢測(cè)重復(fù)序列長(zhǎng)短差異的DNA分子標(biāo)記。SSR分子標(biāo)記因其多態(tài)性高、重復(fù)性好、共顯性、分布均勻、覆蓋面廣等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于生物遺傳圖譜繪制、遺傳多樣性分析、品種鑒定、基因定位和分子標(biāo)記輔助育種等方面。

現(xiàn)有的關(guān)于羊肚菌SSR分子標(biāo)記的研究大多基于不同物種的羊肚菌菌株的遺傳多樣性分析，針對(duì)六妹羊肚菌物種內(nèi)的分子標(biāo)記開(kāi)發(fā)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，根據(jù)上述羊肚菌種業(yè)的發(fā)展現(xiàn)狀，結(jié)合現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)開(kāi)發(fā)精準(zhǔn)有效的六妹羊肚菌菌株品種鑒定方法對(duì)于羊肚菌的產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供用于鑒定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的SSR分子標(biāo)記引物組合，本發(fā)明的第二目的在于提供基于所述SSR分子標(biāo)記引物組合鑒定六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株的方法。

本發(fā)明中六妹羊肚菌ZJYDJ001菌株已于2022年4月26日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心（CGMCC）；保藏編號(hào)為CGMCC?NO.40183。