[發(fā)明專利]小鼠源細(xì)胞STR檢測試劑盒、方法及應(yīng)用

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• 申請日: 2022-11-17
• 公開（公告）號: CN115725749A
• 公開（公告）日: 2023-03-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張明航;張海鑫;彭德炎
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州艾基生物技術(shù)有限公司;廣州金泰生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/35
• 代理公司: 廣州廣典知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44365
• 代理人: 萬志香;顧書玲

本發(fā)明公開了小鼠源細(xì)胞STR的檢測試劑盒和檢測方法，所述試劑盒包括四對熒光通道引物和針對至少一個小鼠源細(xì)胞STR鑒定位點(diǎn)的通用引物，所述通道引物如SEQ ID NO.1?SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列，所述通用引物由5’端的連接序列和3’端的特異性序列組成，所述連接序列為所述通道引物中的一條。所述試劑盒可以實(shí)現(xiàn)對多個STR位點(diǎn)同時檢測，還可以同時實(shí)現(xiàn)對一個人源位點(diǎn)和1個支原體位點(diǎn)進(jìn)行檢測，且成本低。通過本發(fā)明，可以對解決市場上不能對小鼠源細(xì)胞STR分型并進(jìn)行細(xì)胞系鑒定的難題。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)中的基因檢測領(lǐng)域，具體涉及一種小鼠源細(xì)胞STR檢測試劑盒、方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

目前，STR作為一個重要的遺傳標(biāo)記系統(tǒng)，已廣泛應(yīng)用于腫瘤生化研究、法醫(yī)學(xué)個體識別、親權(quán)鑒定和群體遺傳學(xué)分析等領(lǐng)域。STR具有高信息量，在基因組中廣泛分布，可以用PCR擴(kuò)增、電泳分型等方法加以檢測，在很短的時間內(nèi)STR已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各領(lǐng)域，并取得了驚人的進(jìn)展。

細(xì)胞是一種特殊的商品，它具有可復(fù)制性，很容易被商家自行復(fù)制后再出售，但是細(xì)胞傳代的次數(shù)、培養(yǎng)的條件以及是否有交叉污染等都無法得到保障。小鼠細(xì)胞系在實(shí)驗(yàn)室被使用的頻率僅次于人源細(xì)胞，并廣泛被應(yīng)用于人類疾病研究、重組蛋白工業(yè)和干細(xì)胞研究中。保證小鼠源細(xì)胞使用的準(zhǔn)確性，對實(shí)驗(yàn)的研究起著至關(guān)重要的作用。目前STR基因分型已經(jīng)被ATCC、DSMZ等權(quán)威機(jī)構(gòu)作為金標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用于細(xì)胞株鑒定，關(guān)于STR(Short TandemRepeat，短串聯(lián)重復(fù)序列)它由長度為3～7個堿基對的短串連重復(fù)序列組成，這些重復(fù)序列廣泛存在于人類基因組中，可作為高度多態(tài)性標(biāo)記，被稱為細(xì)胞的DNA指紋。根據(jù)所得的STR分型結(jié)果與細(xì)胞STR數(shù)據(jù)庫比對從而推算出被檢樣品所屬的細(xì)胞系名稱。因此近年來，權(quán)威期刊如Nature和Science為了避免因細(xì)胞錯誤導(dǎo)致的科學(xué)數(shù)據(jù)失真問題，普遍要求作者對所使用的細(xì)胞提供來源說明和鑒定結(jié)果。利用多重?zé)晒釶CR技術(shù)進(jìn)行STR分型及鑒定是目前應(yīng)用最廣泛的方法，小鼠源細(xì)胞STR鑒定的位點(diǎn)有18-3,4-2,6-7,19-2,1-2,7-1,1-1,3-2,8-1,17-2,12-1,5-5，X-1,13-2,2-1,15-3,6-4,11-2共18個STR位點(diǎn)，以上18個STR位點(diǎn)可以為小鼠源細(xì)胞進(jìn)行STR分型及鑒定。由于細(xì)胞培養(yǎng)時容易發(fā)生人源細(xì)胞，小鼠源細(xì)胞，支原體交叉污染。對小鼠源細(xì)胞多個位點(diǎn)同時鑒定是否含有人源細(xì)胞污染或支原體污染是必不可少的，但目前市面上尚未推出小鼠源細(xì)胞STR鑒定且同時可以檢測人源、小鼠源污染的相關(guān)產(chǎn)品。同時，細(xì)胞STR鑒定所需要應(yīng)用的多重?zé)晒釶CR技術(shù)，使用該技術(shù)需要合成與STR位點(diǎn)數(shù)相同的熒光引物，這樣使試劑成本大大提高。

因此推出一款可以同時檢測人源、小鼠源和支原體污染的小鼠源細(xì)胞STR鑒定試劑盒有著很好的應(yīng)用價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種小鼠源細(xì)胞STR的檢測試劑盒，該試劑盒可以實(shí)現(xiàn)對多個STR位點(diǎn)同時檢測，進(jìn)一步還可以同時實(shí)現(xiàn)對一個人源位點(diǎn)和1個支原體位點(diǎn)進(jìn)行檢測，且成本低。

實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案包括如下。

一種小鼠源細(xì)胞STR的檢測試劑盒，包括四對熒光通道引物和針對至少一個小鼠源細(xì)胞STR鑒定位點(diǎn)的通用引物，所述通道引物如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列，所述通用引物由5’端的連接序列和3’端的特異性序列組成，所述連接序列為所述通道引物中的一條。

在其中一些實(shí)施例中，所述小鼠源細(xì)胞STR鑒定位點(diǎn)共18個，其中，18–3_F、4–2_F、6–7_F、19–2_F位點(diǎn)的通用引物用于同一通道1；1–2_F、7–1_F、1–1_F、3–2_F、和8–1_F位點(diǎn)的通用引物用于同一通道2；2–1_F、15–3_F、6–4_F、和11–2_F位點(diǎn)的通用引物用于同一通道3；17–2_F、12–1_F、5–5_F、X-1_F、和3–1_F位點(diǎn)的通用引物用于同一通道4。

在其中一些實(shí)施例中，針對通道1的通道引物為SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2，