[發明專利]一種鑒定中國大鯢種質來源的引物組、試劑盒及其方法

在審

• 申請號: 202211460389.9
• 申請日: 2022-11-17
• 公開（公告）號: CN115927666A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 王慧;王娣;李作美;李妍
• 申請（專利權）人: 蚌埠學院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 吳波

本發明提供了一種鑒定中國大鯢種質來源的引物組、試劑盒及其方法，屬于分子生物學及遺傳學物種鑒定技術領域。本發明所述引物組包括以下任意一種或幾種譜系的引物組：A譜系引物組：Ada?A307F和Ada?A307R，B譜系引物組：Ada?B511F和Ada?B511R，C譜系引物組：Ada?C400F和Ada?C400R，D譜系引物組：Ada?D364F和Ada?D364R，E譜系引物組Ada?E302F和Ada?E302R，F譜系引物組：Ada?F76F和Ada?F76R，G譜系引物組：Ada?G129F和Ada?G129R。本發明所述系列引物組特異性高，PCR擴增后無需測序和序列分析對比，僅通過瓊脂糖凝膠電泳檢測可精準的鑒定出中國大鯢樣品屬于的遺傳譜系。

技術領域

本發明屬于分子生物學及遺傳學物種鑒定技術領域，尤其涉及一種鑒定中國大鯢種質來源的引物組、試劑盒及其方法。

背景技術

目前養殖場大鯢繁殖親本主要為野外來源，但由于缺少合理、系統的管理措施，來自不同地區的個體無序雜交等行為在養殖場中普遍存在，養殖場大鯢個體往往種質來源混亂。不考慮遺傳背景而盲目使用養殖場個體進行增殖放流，很容易使本地野生種群受到基因侵蝕甚至被取代，不僅不能達到物種保護的目的，還加劇本地種群的生存壓力。

傳統的物種種質鑒定方法多采用形態、外觀的辨識方法，這種方法準確性和應用性差，尤其是不同種質來源的個體之間外觀差異不明顯的情況下。隨著分子生物學技術手段的興起，使用基因方法對物種種質來源鑒定是更為普遍的方法。目前常規的運用分子手段對物種進行種質來源鑒定的實驗流程包括樣品采集、DNA提取、PCR擴增、測序和序列分析對比，完成一個個體的鑒定需要大約48小時以上，成本約為80元，鑒定時間長、成本高。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種鑒定中國大鯢種質來源的引物組、試劑盒及其方法，該系列引物組特異性高，PCR擴增后無需進行測序和序列分析對比，可精準的鑒定出中國大鯢樣品屬于的遺傳譜系。

為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案：

本發明提供了一種鑒定中國大鯢種質來源的引物組，所述引物組包括以下任意一種或幾種譜系的引物組：A譜系引物組包括Ada-A307F和Ada-A307R，所述Ada-A307F核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示，所述Ada-A307R核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示；B譜系引物組包括Ada-B511F和Ada-B511R，所述Ada-B511F核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示，所述Ada-B511R核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所示；C譜系引物組包括Ada-C400F和Ada-C400R，所述Ada-C400F核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示，所述Ada-C400R核苷酸序列如SEQ?ID?No.5所示；D譜系引物組包括Ada-D364F和Ada-D364R，所述Ada-D364F核苷酸序列如SEQ?ID?No.6所示，所述Ada-D364R核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示；E譜系引物組包括Ada-E302F和Ada-E302R，所述Ada-E302F核苷酸序列如SEQ?ID?No.7所示，所述Ada-E302R核苷酸序列如SEQ?ID?No.8所示；F譜系引物組包括Ada-F76F和Ada-F76R，所述Ada-F76F核苷酸序列如SEQ?ID?No.9所示，所述Ada-F76R核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示；G譜系引物組包括Ada-G129F和Ada-G129R，所述Ada-G129F核苷酸序列如SEQ?ID?No.10所示，所述Ada-G129R核苷酸序列如SEQ?IDNo.2所示。

本發明提供了所述的引物組在制備鑒定中國大鯢種質來源試劑盒中的應用。

本發明提供一種鑒定中國大鯢種質來源的試劑盒，包括所述的引物組中的任意一種或多種。

優選的，所述試劑盒還包括2×TaqPCR?SuperMix。

本發明提供一種中國大鯢種質來源的鑒定方法，包括如下步驟：