[發明專利]一種人乳腺交界性葉狀腫瘤熒光標記細胞系及其應用

在審

• 申請號: 202211458569.3
• 申請日: 2022-11-17
• 公開（公告）號: CN115747163A
• 公開（公告）日: 2023-03-07
• 發明（設計）人: 邵牧民;江徐;余學問;畢嘉欣
• 申請（專利權）人: 深圳市中醫院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N5/071;C12N15/867;C12N5/10;C12Q1/02;C12R1/91
• 代理公司: 深圳市科進知識產權代理事務所(普通合伙) 44316
• 代理人: 劉建偉

本發明屬于生物醫學技術領域，具體提供了一種人乳腺交界性葉狀腫瘤熒光標記細胞系HBPT0727，通過以下步驟構建：從人體交界性葉狀腫瘤中獲得交界性葉狀腫瘤細胞；對所述交界性葉狀腫瘤細胞進行貼壁培養以得到原代細胞；使用永生化慢病毒感染所述原代細胞；對所述原代細胞繼續穩定擴增培養以得到永生化的交界性葉狀腫瘤細胞系。本發明提供的細胞系建系時間短，生物遺傳性穩定，可多次穩定傳代，且帶有綠色熒光標記，方便后續實驗中腫瘤細胞的追蹤與定位。以該細胞系作為研究模型，有助于探討乳腺葉狀腫瘤的發病機制、表型特征、病理改變以及該腫瘤的發生、發展或轉移規律，還可以用于抗乳腺葉狀腫瘤治療藥物的篩選和評估，具有較高的科研和臨床應用價值。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，具體涉及一種人乳腺交界性葉狀腫瘤細胞系HBPT0727及其應用。

背景技術

乳腺葉狀腫瘤是發生于乳腺的纖維上皮性腫瘤，以乳腺間質細胞腫瘤性增生為主要特征，形態學表現為：雙層的上皮成分呈裂隙狀或腺管狀排列，周圍繞以豐富的間質細胞成分，形成葉狀結構。據WHO第五版腫瘤分類統計，該腫瘤亞裔人群發生率遠高于西方人。目前，WHO采用6種組織形態學指標來界定該腫瘤的良惡性，包括：腫瘤邊界、間質細胞密度、核分裂象、細胞異型性、間質過度增生以及是否存在異源性成分，分為良性、交界性和惡性葉狀腫瘤。大多數葉狀腫瘤是良性的，但復發并不少見；惡性葉狀腫瘤生長速度快，侵襲性強，少數病例可以發生血行轉移。病理學上，提示惡性葉狀腫瘤的形態學指標主要是明顯的核多形性、浸潤性邊界、核分裂象增加(≥5個/mm²)、間質細胞過度生長、有異源性惡性腫瘤分化等特點，當腫瘤不具有惡性葉狀腫瘤的全部惡性組織學特點時，診斷為交界性葉狀腫瘤，病理上認為該腫瘤具有低度惡性生物學行為。

現有的分子標記物在預測葉狀腫瘤的生物學進展方面的價值十分有限，而在乳腺葉狀腫瘤的臨床治療中，化療和放療對葉狀腫瘤的治療效果均不佳，其主要治療方式仍為手術切除，但術后局部復發率較高，22％左右的惡性葉狀腫瘤會發生血源性轉移。因此，進一步探究乳腺葉狀腫瘤的發生、發展機制，尋找精準的治療方法，對降低復發與轉移率尤為重要。

人乳腺葉狀腫瘤的發生、發展機制的研究以及相關臨床診治方案的探索和改進一直都是亟待解決的問題，而建立良好的人乳腺葉狀腫瘤細胞實驗模型是開展相關研究的基礎之一。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術中獲得葉狀腫瘤細胞系主要通過酶消化腫瘤組織這一單一途徑問題，同時解決細胞定位與追蹤困難的問題。

為此，本發明提供了一種人乳腺交界性葉狀腫瘤細胞系HBPT0727，所述細胞系保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地址為：中國.武漢.武漢大學；保藏編號：CCTCC NO:C2022341；保藏日期為2022年11月03日。

本發明還提供了上述人乳腺交界性葉狀腫瘤細胞系HBPT0727的構建方法，包括以下步驟：

(1)取臨床手術切除的交界性葉狀腫瘤組織于培養瓶中靜置培養，待細胞從組織塊邊緣游離長出，定期換液，至預定細胞密度后傳代；

(2)待步驟(1)中細胞生長穩定后，進行慢病毒轉染；

(3)加入puromycin進行篩選，篩選成功后用完全培養基進行傳代培養，經穩定傳代后，得到人乳腺交界性葉狀腫瘤細胞系HBPT0727。

具體的，上述完全培養基為添加了10-15％ FBS和1％ P/S的Advanced DMEM/F12培養基。

具體的，所述步驟(1)具體為：取臨床手術切除的交界性葉狀腫瘤組織，沖洗去除雜質和血液，剪碎后均勻分散在培養瓶底部，將培養瓶瓶底朝上放置于37℃，5.0％CO₂培養箱內靜置培養，次日，將培養瓶正置，加入完全培養基，使培養液浸沒組織塊，待細胞從組織塊邊緣游離長出，定期換液，至預定細胞密度后傳代。