[發(fā)明專利]一種脂質(zhì)體包裹的表面修飾的微生物的制備方法

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• 申請日: 2022-11-21
• 公開（公告）號: CN115737563A
• 公開（公告）日: 2023-03-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張燦陽;邢容藝;劉君禹;劉婉婉;孫威
• 申請（專利權(quán)）人: 清華大學(xué)深圳國際研究生院
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K35/741;A61K47/52;A23L33/135;A23P10/30;A61P1/00
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務(wù)所 11430
• 代理人: 豆津;范盈

1.脂質(zhì)體包裹的表面修飾的微生物的制備方法，其特征在于，微生物表面帶負電，所述制備方法包括如下步驟：

1)制備微生物懸液；

2)使用Ca²⁺的可溶性鹽溶液處理微生物，使微生物表面吸附Ca²⁺離子，然后加入HPO₄^2-的可溶性鹽溶液，Ca²⁺離子和HPO₄^2-離子形成微溶鹽外殼CaHPO₄，獲得表面具有微溶鹽外殼的微生物；

3)將所述表面具有微溶鹽外殼的微生物用緩沖溶液重懸后，加入脂質(zhì)體膜中，自組裝形成脂質(zhì)體包裹的表面修飾的微生物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2)的具體步驟為：將微生物懸液離心，棄上清，先用Ca²⁺的可溶性鹽溶液重懸微生物，然后將HPO₄^2-的可溶性鹽溶液逐滴加入其中，待HPO₄^2-的可溶性鹽溶液全部加入后，輕微振蕩，獲得表面具有微溶鹽外殼的微生物；

優(yōu)選地，所述微生物懸液離心時的離心條件為1000-5000rpm，5-15min；

優(yōu)選地，所述輕微振蕩采用渦旋振蕩器低或中頻率振蕩，振蕩時間為1-5min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述Ca²⁺的可溶性鹽溶液為CaCl₂；

所述HPO₄^2-的可溶性鹽溶液為Na₂HPO₄。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述脂質(zhì)體膜包含磷脂和膽固醇；

優(yōu)選地，所述脂質(zhì)體由二硬脂酰磷脂酰甘油和膽固醇組成；

優(yōu)選地，所述二硬脂酰磷脂酰甘油和膽固醇的質(zhì)量比為4:1；

優(yōu)選地，通過旋蒸制備脂質(zhì)體膜，所述旋蒸條件為：壓強0-200hPa，溫度40-65℃，轉(zhuǎn)速10-60rpm，時間15-60min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3)所述緩沖溶液為Tris-HCl；

優(yōu)選地，所述Tris-HCl的pH＝7.4。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述微生物懸液中微生物的量在10⁴–10⁸CFU之間；

所述Ca²⁺的可溶性鹽的摩爾份數(shù)60-300份；

所述HPO₄^2-的可溶性鹽的摩爾份數(shù)12-60份；

所述脂質(zhì)體的摩爾份數(shù)1-5份。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3)將所述表面具有微溶鹽外殼的微生物用緩沖溶液重懸后，加入脂質(zhì)體膜中，超聲振蕩后，進行渦旋振蕩；

優(yōu)選地，所述超聲振蕩為低或中功率振蕩10-30S，振蕩頻率為60Hz；

優(yōu)選地，所述渦旋振蕩條件為高功率振蕩10-30min。

8.權(quán)利要求1-7任一項所述制備方法制備得到的脂質(zhì)體包裹的表面修飾的微生物。

9.一種益生菌口服遞送體系，其特征在于，所述益生菌口服遞送體系為脂質(zhì)體包裹的表面修飾的益生菌，所述脂質(zhì)體包裹的表面修飾的益生菌通過權(quán)利要求1-7任一項所述制備方法制備。

10.一種改善腸道菌群結(jié)構(gòu)的保健品、食品、藥物或益生菌產(chǎn)品，其特征在于，包括一種或幾種權(quán)利要求9所述的益生菌口服遞送體系。