[發明專利]一種用于載玻片樣品染色反應的清洗方法

在審

• 申請號: 202211432695.1
• 申請日: 2022-11-16
• 公開（公告）號: CN115855605A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 陳觀生;鄒昊;唐玉豪;何俊峰
• 申請（專利權）人: 達科為（深圳）醫療設備有限公司
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 丁楊

本申請公開了一種用于載玻片樣品染色反應的清洗方法，屬于對載玻片上組織或細胞進行染色的改進的方法和裝置技術領域，包括以下步驟：采用噴頭產生多根平行束狀排列的清洗試劑射流體，對載玻片的噴射區表面進行傾斜噴射，通過調整噴頭高度、噴頭與載玻片間的距離以及清洗試劑射流體的噴射角度和噴射速度，并經過一段緩沖距離，使流體匯集分布形成瀑布狀流體，流經樣品區表面對樣品進行流動清洗，以去除前步反應剩余試劑。本申請清洗效率高、清洗試劑用量少且樣品損失率低；通過調整壓力或噴頭參數，能夠快速適應不同的清洗力度的要求；結構簡單，占用空間少，能夠適應多種安裝場合，適宜推廣使用。

技術領域

本申請涉及對載玻片上組織或細胞進行染色的改進的方法和裝置技術領域，尤其是涉及一種用于載玻片樣品染色反應的清洗方法。

背景技術

免疫組化是一種對載玻片上組織或細胞進行染色的技術，通過對組織或細胞的染色可以在顯微鏡下觀察樣本中組織和細胞的狀態，以進行病癥診斷。

通常免疫組化染色需要多種試劑在樣本上逐步進行反應來實現樣本的染色，為保證各反應試劑的順利進行，在各反應試劑之間需要通過清洗步驟去除當前反應后多余的試劑，以保證下一步的試劑能夠與被檢測組織正常進行反應，從而保證染色的質量。

當前手工染色過程通常采用一種中間試劑(例如緩沖液)對反應試劑進行沖洗，采用傾倒緩沖液的方式去除當前步驟多余的反應試劑，能夠保證清洗干凈，但消耗的試劑量非常大，而且傾倒過程水流力度無法控制，常直接濺射到反應區，可能會破壞或沖走待測試組織或細胞。

而另一種通過儀器來自動化實現免疫組化的染色過程，如現有技術中樣本反應試劑(包括清洗步驟使用的中間試劑)的清除是通過層流替換實現，具體是通過一側加液一側抽液的方式，使流體依靠毛細管力或沿斜坡依靠重力自行流動，流速較慢且需要重復清洗多次，其消耗的試劑量少，但其對反應試劑的清洗不夠徹底，殘留的反應試劑將導致染色結果質量下降。究其原因可能是因為流體流速過慢，無法在短時間內充分交換液體。

因此可認為，現有載玻片清洗方法在流體流速(即對樣品的破壞性或稱損失率)與清洗效率二者之間失衡，要么清洗效率高效果好、樣品損失率較大，如離心清洗或手動傾倒清洗；要么樣品損失率低、但清洗效率較低且清洗效果一般，如現有層流替換技術。本申請應運而生，試圖提出一種清洗效率高、容易控制且不會對載玻片生物樣品造成沖擊或破壞的新型清洗工藝。

發明內容

本申請的目的是為了解決現有技術中存在的缺點，而提出的一種用于載玻片樣品染色反應的清洗方法。

本申請采用如下的技術方案：

一種用于載玻片樣品染色反應的清洗方法，包括以下步驟：采用噴頭產生多根平行束狀排列的清洗試劑射流體，通過調整噴頭高度、噴頭與載玻片間的距離以及清洗試劑射流體的噴射角度和噴射速度，使清洗試劑射流體對載玻片樣品區以外的表面區域進行傾斜噴射，產生散射和濺射，并經過一段緩沖距離，匯集分布后的流體流經樣品區表面對樣品進行流動清洗，以去除樣品中的反應剩余試劑。

通過采用上述技術方案，試圖通過密排孔噴射方式，使流體在玻璃表面形成加速的瀑布狀流體，比完全依靠流體的自重流動產生的層流流速要快，從而達到提高現有層流替換清洗技術中清洗效率的目的。

現有技術中的層流替換，如專利ZL03817566.5可以理解為完全依靠流體的自重流動，或現有細胞層流洗滌機，則是在短距離內通過一側抽液一側吸液的方式造成細胞上方溶液的層流體，以實現溶劑稀釋溶解替換的清洗方式，也較難應用在較寬的載玻片區域清洗。以上兩種技術都等同于在較慢流速u₀的層流體下，對樣品區進行清洗，其流速較慢，不會對樣品區產生沖擊和損壞，但其流速過慢，造成流經速度過慢，溶劑溶解交換速度較慢，故需要多次反復操作，對一些頑固性殘留試劑往往無效，還需要采用離心清洗。

優選地，傾斜噴射具體是指清洗試劑射流體與載玻片上表面之間夾角范圍為10-60°，夾角范圍進一步優選為為32±5°。