[發(fā)明專利]一種生物標(biāo)志物在制備檢測帕金森病試劑盒中的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211426820.8
• 申請日: 2022-11-15
• 公開（公告）號: CN115754297A
• 公開（公告）日: 2023-03-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王雪梅;馮濤;柳欣
• 申請（專利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11471
• 代理人: 秦瓊

1.一種生物標(biāo)志物在制備試劑盒中的應(yīng)用，其中，所述試劑盒用于評估或判斷受試者發(fā)生帕金森病的風(fēng)險，所述生物標(biāo)志物包括紅細胞內(nèi)α-syn寡聚體和紅細胞內(nèi)總蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述生物標(biāo)志物為紅細胞內(nèi)α-syn寡聚體的濃度/總蛋白的濃度。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述評估或判斷包括以下步驟：

(1)測定所述受試者的血液樣品中紅細胞內(nèi)的α-syn寡聚體的濃度和總蛋白的濃度；

(2)將步驟(1)測定得到的α-syn寡聚體蛋白的濃度、總蛋白的濃度與參考值進行比較，以判斷所述受試者發(fā)生帕金森病的風(fēng)險。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟(2)中，當(dāng)紅細胞中的α-syn寡聚體的濃度與總蛋白的濃度的比值高于15.03ng/mg時，判斷受試者患有帕金森病。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的應(yīng)用，其特征在于，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法測定α-syn寡聚體濃度。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述酶聯(lián)免疫吸附測定法包括以下步驟：

S1、非生物素化的3D5單克隆抗α-syn抗體包被在ELISA板上，用含有0.05％吐溫20的磷酸鹽緩沖液洗滌后，用含有2.5％明膠的PBST溶液進行封閉；

S2、將受試者的血液樣品、α-syn寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品用磷酸鹽緩沖液稀釋至500nM，分別添加到ELISA板上，并進行孵育；

S3、ELISA板上添加1μg/ml的生物素化3D5抗體，然后進行孵育；

S4、用PBST溶液洗ELISA板，加入堿性磷酸酶后，進行孵育；

S5、ELISA板的每個反應(yīng)孔中添加對硝基苯磷酸鹽，測定405nm和603nm處的吸光度值。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟S2中，所述α-syn寡聚體標(biāo)準(zhǔn)品的配制方法為：將α-syn樣品用PBS溶解至100μM的終濃度，并在37℃下孵育48小時，并以500-2000rpm的速度連續(xù)振蕩。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，按照H-Y分級，所述帕金森病包括H-Y分級1級、2級、3級和4級。