[發明專利]一種重組人白細胞介素-2純化方法

在審

• 申請號: 202211419996.0
• 申請日: 2022-11-14
• 公開（公告）號: CN115894663A
• 公開（公告）日: 2023-04-04
• 發明（設計）人: 尚振華;劉秀悅;李港;馬小涵;李晨輝;劉超
• 申請（專利權）人: 河北科技大學;河北菲尼斯生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/55
• 分類號: C07K14/55;C07K1/18;C07K1/36;C07K1/34
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1.一種通過離子交換層析法純化hIL-2的方法，其特征在于包括采用陽離子交換層析法和陰離子交換層析法相結合的方法進行純化。

2.如權利要求1所述的離子交換層析法純化hIL-2的方法，包括采用陽離子交換層析法和陰離子交換層析法相結合的方法，其特征在于具體過程為將含有hIL-2的待純化樣品上樣至陽離子柱，利用洗脫液對陽離子柱進行梯度洗脫，收集洗脫峰主成分用超濾膜包超濾脫鹽后用陰離子柱進行純化，收集流穿峰以獲得純化的hIL-2。

3.如權利要求2所述的離子交換層析法純化hIL-2的方法，包括采用陽離子交換層析法和陰離子交換層析法相結合的方法，其特征在于，具體步驟如下：

（1）陽離子交換層析純化：用平衡液平衡陽離子柱后，將含有hIL-2的待純化樣品上樣至陽離子柱，上樣完成后，用平衡液平衡至基線平穩，用洗脫液對陽離子柱進行梯度洗脫，收集紫外吸光范圍為20MAU-800MAU-20MAU洗脫峰主成分；

（2）濃縮脫鹽：用平衡液充分平衡超濾膜包，將陽離子交換層析純化得到的洗脫峰主成分用超濾膜包進行濃縮脫鹽，待樣品電導率低于5ms/cm為止，收集樣品；

（3）陰離子交換層析法純化：用平衡液充分平衡陰離子柱至基線平穩，將脫鹽收集的樣品上樣，收集流穿蛋白峰溶液，并加吐溫-20混勻后，將得到的蛋白峰溶液混合液用5KD濃縮膜濃縮，用PH4.4的醋酸-醋酸鈉緩沖液補至原體積，重復兩次即可換液，得到hIL-2純化液。

4.如權利要求2或3所述的通過離子交換層析法純化hIL-2的方法，其特征在于：所述陽離子層析法填料為SP?Sepharose?Fast?Flow。

5.如權利要求2或3所述的通過離子交換層析法純化hIL-2的方法，其特征在于：所述陰離子層析法填料為Q?Sepharose?Fast?Flow。

6.如權利要求2或3所述的通過離子交換層析法純化hIL-2的方法，其特征在于：所述超濾膜包分子量為5KD。

7.如權利要求3所述的通過離子交換層析法純化hIL-2的方法，其特征在于所述平衡液和洗脫液為磷酸緩沖液。

8.如權利要求3所述的通過離子交換層析法純化hIL-2的方法，其特征在于：所述陽離子交換層析純化與陰離子交換層析純化的平衡液為磷酸緩沖液為5-20mM的PB緩沖液，PH為5.9-6.1；洗脫液為含有鹽的磷酸緩沖液，優選磷酸緩沖液為5-20mM的PB緩沖液，鹽離子濃度為1M。

9.如權利要求3所述的通過離子交換層析法純化hIL-2的方法，其特征在于：所述陽離子交換層析純化洗脫液以15%-50%進行梯度洗脫。

10.如權利要求3所述的通過離子交換層析法純化hIL-2的方法，其特征在于：所述脫鹽過程中平衡液為5-20mM的PB緩沖液。