[發明專利]一種微生物保存液及其使用方法

有效

• 申請號: 202211416787.0
• 申請日: 2022-11-14
• 公開（公告）號: CN115466682B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 楊啟文;喻瑋;朱盈;賈沛瑤;夏涵;官遠林;胡龍;李長誠;佟斯垚;溫顏華
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院北京協和醫院;予果生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04
• 代理公司: 西安鼎邁知識產權代理事務所(普通合伙) 61263
• 代理人: 劉喜保

本發明屬于微生物保存技術領域，涉及一種微生物保存液及其使用方法。本發明提供的微生物保存液，以質量份計，由以下有效成分構成：聚乙烯醇42?75份、低密度脂蛋白2?3份、四氫嘧啶6?40份、硫乙醇酸鈉0.5?1.2份和甘油100份。本發明提供的微生物保存液為微生物保存提供載體，能有效保護微生物活性，提高菌體存活率和菌體活性。

技術領域

本發明屬于微生物保存技術領域，涉及一種微生物保存液及其使用方法。

背景技術

病原微生物也是一種重要的生物資源，它的保存不僅有利于重現已經做過的實驗，證實發現新的菌種，而且也是研究、推廣、開發和實際應用科研成果的基礎。保存的菌種有的是開發利用的對象，有的是悉心研究的成果，有從自然界分離得到的，有經生物技術修飾改造獲得的，都有著極大的研究價值和開發利用的潛力。

為得到一種能長期保存菌種的理想方法，以便更好地為科研、教學提供標準菌株。不同菌種或不同要求，適用不同的保藏方法，一般微生物培養物的保藏方法為：斜面保藏、液體石蠟保藏、冷凍干燥保藏、液氮超低溫保藏法、低溫冷凍保藏法。斜面保藏法，保藏期短；液體石蠟保藏法，必須直立存放，占空間大，不便攜帶；凍干保藏、液氮超低溫保藏法，技術復雜，技術含量高，設備投入高，運行成本高，適合專業保藏機構，不適合生產企業。

低溫保藏法是將菌種放置在低溫冰箱中以減緩生理活動而進行的一種保藏方法。目前采用的保藏方法有兩種：一是4℃冰箱直接保存（短期）；二是，菌液中加入一定比例的甘油混合后-80℃保存（中長期）。低溫保存，無論是4℃還是-20℃、-80℃，加入一定比例的保護劑，可有效保護微生物活性，提高菌體存活率。對于各種微生物種類及結構不同，其在低溫保存中的最佳保護劑配方也不同。目前，現有的微生物低溫保存保護劑常見的為甘油、甘露醇、脫脂奶粉或培養液中的一種。但是，實驗結果證明，現有的微生物采用甘油作為低溫保存保護劑，微生物經過低溫保存后的存活率和菌體活性仍然不高。

發明內容

本發明的目的在于開發出一種微生物保存液，針對腸道內病原菌種，提高微生物經過低溫保存后的存活率和菌體活性。

基于上述目的，本發明提供了一種含納米顆粒的微生物核酸檢測試劑盒及檢測方法來滿足本領域的這種需要。

一方面，本發明涉及一種微生物保存液，其以質量份計，由以下有效成分構成：聚乙烯醇42-75份、低密度脂蛋白2-3份、四氫嘧啶6-40份、硫乙醇酸鈉0.5-1.2份和甘油100份；優選地，以質量份計，由以下有效成分構成：聚乙烯醇53份、低密度脂蛋白2.6份、四氫嘧啶27份、硫乙醇酸鈉0.8份和甘油100份。

進一步地，本發明提供的微生物保存液中，其制備方法為：將聚乙烯醇水浴加熱到60℃后，加入四氫嘧啶和硫乙醇酸鈉，混合均勻后降溫至35-40℃，加入低密度脂蛋白和甘油，攪拌均勻調整pH至7.2-7.4，115℃滅菌15min。

進一步地，本發明提供的微生物保存液中，使用方法為：將所述微生物保存液水浴加熱至35-40℃，檢測pH維持為7.2-7.4，加入待保存菌種，采用惰性氣體加壓冷凍保存。

進一步地，本發明提供的微生物保存液中，所述惰性氣體為氦氣、氬氣、氙氣中的一種，所述惰性氣體的氣體濃度不低于85%；優選地，所述惰性氣體為氦氣。