[發明專利]靶向甲型流感病毒核蛋白的抗體及其應用

有效

• 申請號: 202211415718.8
• 申請日: 2022-11-11
• 公開（公告）號: CN115819566B
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發明（設計）人: 羅海峰;奚建紅;滕宏;王文峰;周昊;陳超;鮑勇剛;萬歡
• 申請（專利權）人: 杭州華葵金配生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

本發明提供一種靶向甲(A)型流感病毒核蛋白的抗體及其應用?？贵w的輕鏈、重鏈的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO:1、2所示。利用該抗體開發了側向流免疫層析檢測試劑。該抗體靈敏度高，特異性好，在免疫診斷領域具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明涉及免疫檢測技術領域，具體地說，涉及一種靶向甲(A)型流感病毒核蛋白的抗體及其應用。

背景技術

正黏病毒科(Orthomyxoviridae)一共有7個病毒屬成員，其中有4個是流感病毒屬(Influenza?A/B/C/D?virus；分別對應甲、乙、丙、丁型流感病毒)。流感病毒樣本一般呈橢圓狀或球狀(直徑約100nm)。流感病毒在某些情況下呈長絲狀(長軸約20μm)，從臨床上分離得到的病毒樣本常呈長絲狀。

其中，流感病毒根據宿主、分離的地點、分離株的編號、分離的年份以及流感病毒表面的兩種糖蛋白--血凝素(H或HA，haemagglutinin)和神經氨酸酶(N或NA，neuraminidase)的抗原性不同，來進行命名。

流感病毒可引起世界范圍內的大流行。野生鳥類被認為是流感病毒的天然宿主，因為野生鳥類季節性的遷移使得流感病毒具有傳播并引起季節性流感的能力。目前發現了18種不同的血凝素亞型(HA)和11種不同的神經氨酸酶(N或者NA)亞型，其中，H1-H16和N1-N9亞型可從野生鳥類體內分離獲得，被認為是典型流感病毒。甲(A)型流感病毒在4個流感病毒屬中的宿主范圍最為廣泛，宿主不但包括野生鳥類或其近親家禽，還包括家畜(如H5N1和H7N9可人畜共患感染)、人類(如H1N1和H3N2)以及其他野生動物例如蝙蝠(如H17N10和H18N11)，進一步擴大了其潛在的同種系或跨種系的傳播范圍。

流感病毒是一種基因組包含分節段(節段1～節段8)的單鏈負義病毒核糖核酸(viral?ribonucleic?acid,vRNA)的有包膜病毒。病毒基因組編碼的主要蛋白質為：聚合酶蛋白亞基(RNA?polymerase?subunit?1,2,A，A-X?and?1-F2；PB1,PB2,PA,PA-X和PB1-F2)，核蛋白(nucleoprotein，NP)，2種表面糖蛋白(血凝素HA和神經氨酸酶NA)，2種基質蛋白(matrix?proteins，M1和M2；其中M2也是一種跨膜的離子通道蛋白)，非結構蛋白(non-structural?protein?1，NS1)與核輸出蛋白(nuclear?export?protein，NEP)。

流感病毒的生命周期分為以下幾個步驟：病毒吸附并進入宿主細胞、病毒脫衣殼、病毒核糖核蛋白(viral?ribonucleoprotein，vRNP)入核、病毒基因組在核內轉錄與復制、病毒核糖核蛋白(vRNP)出核、病毒組裝和病毒出芽釋放。

流感病毒的包膜是子代病毒出芽時從宿主細胞膜獲得的雙層脂膜，其包膜下有一層最豐富的病毒基質蛋白(M1)環繞著病毒基因組：每一種病毒核糖核酸(vRNA)以病毒核糖核蛋白(vRNP)的形式存在，并可以表達一種或多種病毒蛋白；每一種病毒核糖核蛋白(vRNP)由三部分組成，分別為寡聚體核蛋白(nucleoprotein，NP)和病毒核糖核酸(vRNA)和異源三聚體病毒RNA聚合酶(RNA?polymerase)。其中，核衣殼蛋白(Nucleocapsids，N蛋白)由寡聚體核蛋白即寡聚體NP蛋白，和病毒核糖核酸(vRNA)構成的復合物。

另外，病毒包膜上嵌有三種病毒蛋白：血凝素(HA)、神經氨酸酶(NA)和跨膜通道蛋白(M2)。其中，血凝素(HA)和神經氨酸酶(NA)是兩種主要的病毒抗原：血凝素(HA)負責結合宿主細胞上的唾液酸受體；神經氨酸酶(NA)負責將出芽的子代病毒顆粒釋放到宿主細胞外；離子通道蛋白(M2)負責病毒進入宿主細胞時的酸化，并對子代病毒的出芽釋放有重要作用。

甲(A)型流感病毒的核蛋白(nucleoprotein，NP)是主要的內部結構蛋白，由病毒基因組節段5編碼而成。核蛋白(NP)基因長度一般約1565bp左右，表達的蛋白產物分子量約為53-56KD。