[發(fā)明專利]一種快速鑒定布魯菌的方法及其使用的引物組組合在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202211409912.5 | 申請日： | 2022-11-11 |
| 公開（公告）號： | CN115725760A | 公開（公告）日： | 2023-03-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 辛文文;李佳欣;張嘉鑫;康琳;王景林;王菁;高姍;袁媛;徐健皓;李巖偉 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫(yī)學研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 閆書寧 |
| 地址： | 100039*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 快速 鑒定 布魯菌 方法 及其 使用 引物 組合 | ||
本發(fā)明公開了一種快速鑒定布魯菌的方法及其使用的引物組組合。本發(fā)明通過對布魯菌的核心基因組序列進行分析，從而獲得了5個布魯菌12個種間的高度保守特異序列(即布魯菌的特異序列標簽)，之后依據(jù)5個布魯菌的特異序列標簽的核苷酸序列設(shè)計并合成五個引物組。每個引物組可以完全覆蓋布魯菌現(xiàn)有的12個種的鑒定。目前，國內(nèi)外尚無利用本發(fā)明提供的布魯菌的特異序列標簽特異性鑒定布魯菌的熒光定量PCR方法，本發(fā)明提供的方法可以簡單、快速、靈敏、特異的檢測布魯菌，避免漏檢，為布病疫情的早期預警及其防控提供有力支撐。本發(fā)明具有重要的應用價值。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種快速鑒定布魯菌的方法及其使用的引物組組合。
背景技術(shù)
布魯菌病(Brucellosis，簡稱“布病”)是一種由布魯菌引起的人畜共患傳染病。布魯菌為革蘭陰性桿菌。根據(jù)不同的宿主偏好、表型、致病性以及病原學特征，布魯菌一般可分為6個經(jīng)典種19個生物型，分別為B.melitensis(羊)、B.abortus(牛)、B.suis(豬)、B.canis(犬)、B.neotomae(沙林鼠)和B.ovis(綿羊)；6個新發(fā)現(xiàn)的種，分別為B.microti(田鼠)、B.pinnipedialis(鰭足類)、B.ceti(鯨類)、B.inopinata(從人類天然宿主中分離出來)、B.papionis(狒狒)和B.vulpis(狐貍)。布魯菌不同種、型之間親緣性很近。早在1968年，國外學者就對公認的6種布魯菌進行了測序鑒定，結(jié)果表明，布魯菌各菌種之間高度同源，基因組一致性達90％以上，各菌種之間基因組差異較小。目前，已有多種檢測布魯菌的方法，如細菌培養(yǎng)分離法、血清學診斷法以及免疫學方法，但上述方法均存在諸多不足。
隨著測序技術(shù)的快速發(fā)展，測序成本不斷下降、測序速度和準確性不斷提高，這使得布魯菌群體基因組學的應用日益增多。盡管如此，由于布魯菌與其他物種之間的高度相似性，使得檢測工作存在諸多問題。因此，需要更可靠、更準確的靶標來幫助研究人員快速識別布魯菌，并將其與相關(guān)物種區(qū)分開。
隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展，熒光定量PCR檢測技術(shù)已逐漸成為診斷布病的重要工具。但現(xiàn)階段，研究者們針對布魯菌所建立的熒光定量PCR方法存在特異性問題，如引物探針與其他菌屬存在交叉。因此，篩選布魯菌高特異序列，并針對篩選的序列設(shè)計一種高靈敏度、特異性的引物探針通過熒光定量PCR方法對布魯菌進行鑒定，可以更好地加強布病病原監(jiān)測能力，為布病的防治提供強有力的技術(shù)支撐。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是簡單、快速、靈敏、特異性的檢測布魯菌，避免漏檢。
本發(fā)明首先保護一種引物組組合，可包括引物組BRU-1、引物組BRU-2、引物組BRU-3、引物組BRU-4和/或引物組BRU-5；
引物組BRU-1可由引物對BRU-1和探針BRU-1-P組成。引物對BRU-1可由引物BRU-1-F和引物BRU-1-R組成。探針BRU-1-P的一個末端具有熒光標記，另一端具有熒光猝滅基團。引物BRU-1-F的核苷酸序列可如SEQ ID NO:1所示。引物BRU-1-R的核苷酸序列可如SEQ IDNO:2所示。探針BRU-1-P的核苷酸序列可如SEQ ID NO:3所示。
引物組BRU-2可由引物對BRU-2和探針BRU-2-P組成。引物對BRU-2可由引物BRU-2-F和引物BRU-2-R組成。探針BRU-2-P的一個末端具有熒光標記，另一端具有熒光猝滅基團。引物BRU-2-F的核苷酸序列可如SEQ ID NO:4所示。引物BRU-2-R的核苷酸序列可如SEQ IDNO:5所示。探針BRU-2-P的核苷酸序列可如SEQ ID NO:6所示；
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于中國人民解放軍軍事科學院軍事醫(yī)學研究院，未經(jīng)中國人民解放軍軍事科學院軍事醫(yī)學研究院許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202211409912.5/2.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
