[發明專利]一種長鏈非編碼RNA RP11-732M18.3的檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 202211391728.2
• 申請日: 2022-11-08
• 公開（公告）號: CN116042826A
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 康春敏
• 申請（專利權）人: 廣東省中醫院（廣州中醫藥大學第二附屬醫院;廣州中醫藥大學第二臨床醫學院;廣東省中醫藥科學院）
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 余璟儀

本發明提供了一種長鏈非編碼RNA?RP11?732M18.3檢測方法及其應用，屬于分子生物醫學技術領域。本發明的長鏈非編碼RNA?RP11?732M18.3的檢測方法為提取樣本中的RNA，進行RNA逆轉錄反應，得cDNA進行實時熒光定量PCR反應，檢測長鏈非編碼RNA?RP11?732M18.3的表達。本發明通過對血清中RNA進行提取檢測，操作簡便易行，檢測特異性高、靈敏度高，經濟快速；本發明利用高保真M?MLV酶，通過對引物的設計，使長鏈非編碼RNA?RP11?732M18.3的檢測達到高靈敏度和特異性的目的。

技術領域

本發明屬于分子生物醫學技術領域，具體涉及一種長鏈非編碼RNA?RP11-732M18.3檢測方法及其應用。

背景技術

腦和其他神經系統腫瘤是40歲以下男性和20歲以下女性癌癥死亡第一大原因。膠質瘤占顱內原發惡性腫瘤的80％，是對人類最具攻擊性的癌癥之一，包括膠質母細胞瘤和世界衛生組織的II級和III級腫瘤(低級別膠質瘤)，具有惡性比例高、復發率高和預后差的特點。近年來，中國腦膠質瘤患病率逐年上升，年增長率高達1.2％。隨著現代顯微神經外科技術及術中導航等輔助技術的飛速發展、分子病理學檢測技術的應用，臨床療效有所提高，但是由于膠質瘤細胞高增殖性和侵襲性，部分患者腫瘤進展快，其中膠質母細胞瘤患者5年生存率僅為17.19％。因此，膠質瘤進展快、預后差是一直困擾臨床的難題。目前膠質瘤診斷依賴MRI等影像檢查，具有傷害大、費用高、患者醫從性低等不足，患者就診時往往處于晚期。尋找新的、易檢測早期診斷標志物對提高治療效果和改善患者生存質量具有重要臨床應用價值。

lncRNA是一類不具備蛋白編碼能力的長度大于200nt的RNA。lncRNA起初被認為是基因組轉錄的“噪音”，是RNA聚合酶II轉錄的副產物，不具有生物學功能。然而，近年來的研究表明，lncRNA通過trans(反式)或cis(順式)作用方式影響靶蛋白功能，調控細胞增殖、遷移、周期、凋亡等功能，影響膠質瘤的發生發展和預后。近年來研究指出，外周血中循環lncRNA可作為腫瘤標志物。但是目前尚無lncRNA應用過于膠質瘤的診斷。通過對人膠質瘤標本進行lncRNA芯片檢測，發現lncRNA?RP11-732M18.3在膠質瘤組織中表達升高(2.53-fold?change,p.05)。目前檢測血清中lncRNA的方法主要分成三大類：1)一步法：標本提取RNA后，特異性引物PCR擴增檢測；2)兩步法：第一步是逆轉錄RNA，將RNA逆轉錄為cDNA，第二步是PCR定量；3)三步法：提取RNA，逆轉錄成，利用引物擴增特異片段，最后瓊脂糖電泳，可以做到目的片段定性和半定量。

目前lncRNA的PCR方法存在特異性差、半定量、靈敏度低等不足。目前尚無血清檢測lncRNA?RP11-732M18.3的方法。

發明內容

針對上述問題，本發明的目的在于提供一種長鏈非編碼RNA?RP11-732M18.3檢測方法及其應用，解決目前lncRNA采用PCR檢測方法存在的特異性差、半定量、靈敏度低燈問題。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：一種長鏈非編碼RNA?RP11-732M18.3的檢測方法，所述的檢測方法為提取樣本中的RNA，進行RNA逆轉錄反應，得cDNA進行實時熒光定量PCR反應，檢測長鏈非編碼RNA?RP11-732M18.3的表達。研究表明，長鏈非編碼RNARP11-732M18.3在膠質瘤組織中表達升高(2.53-fold?change,p.05)。但目前尚無檢測血清中長鏈非編碼RNA?RP11-732M18.3的方法。本申請發明人經過大量的實驗發現，采用上述方法能夠準確的檢測血清中的長鏈非編碼RNA?RP11-732M18.3，且靈敏度高、特異性好。

作為本發明所述的長鏈非編碼RNA?RP11-732M18.3的檢測方法的優選實施方式，所述逆轉錄反應的特異性引物的核苷酸序列如SEQID?NO:1所示。本申請發明人設計逆轉錄反應的特異性引物，能夠提高長鏈非編碼RNA?RP11-732M18.3的檢測的靈敏度和特異性。