[發明專利]一種用于同時檢測SDZ、SDM和SMP的核酸適配體及其試劑盒使用方法

在審

• 申請號: 202211386917.0
• 申請日: 2022-11-07
• 公開（公告）號: CN115612688A
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發明（設計）人: 樂濤;唐佳明;謝永
• 申請（專利權）人: 重慶師范大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;G01N33/53;G01N33/58
• 代理公司: 北京哌智科創知識產權代理事務所(普通合伙) 11745
• 代理人: 孫東

本發明涉及生物檢測技術領域，具體是一種用于同時檢測SDZ、SDM和SMP的核酸適配體及其試劑盒使用方法。一種用于同時檢測SDZ、SDM和SMP的核酸適配體，核酸適配體的序列為剪切后的SAs16?1和剪切前的SAs16，核酸適配體由單鏈DNA組成，且5’末端標記FAM熒光基團。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體是一種用于同時檢測SDZ、SDM和SMP的核酸適配體及其試劑盒使用方法。

背景技術

磺胺類抗生素因其抗感染效率高、成本低，在畜牧業中經常用于預防和治療牲畜的細菌感染，并被列為全球用量最多的十大獸用抗生素之一。然而，已有研究證明，高水平的磺胺類家族抗生素的殘留物可以通過食物鏈在人體中積累，導致過敏反應、肝功能受損、泌尿系統受損和溶解性貧血癥狀。因此，美國、歐盟和中國對食用組織中磺胺類的最大殘留限制為100μg/kg。目前對磺胺類抗生素的檢測方法大多都基于酶聯免疫分析法、高效液相色譜法(HPLC)和毛細管電泳法、化學熒光法。雖然這些方法具有可靠和敏感等優點，但它們通常需要操作人員具有深厚的專業知識，而且設備昂貴和耗時。因此，有必要開發一種簡單、快速、低成本的檢測方法來檢測食用組織中磺胺類抗生素的殘留。

近年來，在檢測領域出現了一種新型的核酸探針：核酸適配體(簡稱：適配體)。適配體又被稱為“化學抗體”，相比于傳統的抗體有著諸多的優勢，比如：化學性質穩定，易修飾，篩選時間短，不需要經過動物實驗等。適配體通過指數富集的配體系統進化(SELEX)得到，具有高親和力和高特異性，能夠與目標分子特異性結合，已被用于檢測多種物質，如：金屬離子、抗生素、毒素、細胞、病毒、蛋白質等。適配體已經廣泛應用于生物醫藥行業以及食品環境檢測等領域。目前已經證實適配體在特定的緩沖液體系下可以折疊成獨特的空間結構，這種結構可以通過范德華力、氫鍵和疏水作用與目標分子特異性緊密結合。

目前已報道的適配體都只能識別單一靶標。在磺胺類抗生素家族，還未有一條適配體能夠識別多個靶標的報道。

發明內容

本發明為克服上述情況不足，旨在提供一種能解決上述問題的技術方案。

一種用于同時檢測SDZ、SDM和SMP的核酸適配體，核酸適配體的序列為剪切后的SAs16-1和剪切前的SAs16，核酸適配體由單鏈DNA組成，且5’末端標記FAM熒光基團。

進一步的，所述核酸適配體通過以下方法制備：

S11：通過基于氧化石墨烯的系統指數富集的配體系統進化技術GO-SELEX串聯-并聯法篩選得到SAs16的適配體序列；

S12：通過對適配體序列進行一級結構、二級結構、三級結構進行分析得到SAs16-1序列；

S13：通過熒光分析法測定、分子對接、分子動力學模擬得到核酸適配體的核心識別區域。

一種基于以上所述一種用于同時檢測SDZ、SDM和SMP的核酸適配體的試劑盒使用方法，包括以下步驟：

S21：設置含核酸適配體的試劑盒；

S22：獲取樣品并對其進行預處理；

S23：將處理好的樣品放入試劑盒中搖勻30min；

S24：向試劑盒中加入Fe₃O₄/Au/g-C₃N₄，繼續搖勻10min；

S25：磁分離后吸取上層清液并測熒光值。

進一步的，步驟S21中試劑盒包括以下組分：熒光標記的核酸適配體、磷酸鹽緩沖液。

進一步的，步驟S22中樣品為牛奶、蜂蜜中至少一種。

與現有技術相比，本發明取得的有益效果為：