[發明專利]β-葡聚糖與M2巨噬細胞靶向肽偶聯物、制備方法及重塑腫瘤微環境和免疫抗腫瘤的應用

在審

• 申請號: 202211383698.0
• 申請日: 2022-11-07
• 公開（公告）號: CN115887689A
• 公開（公告）日: 2023-04-04
• 發明（設計）人: 蔡超;李佳;于廣利;楊雨;劉楊;王德鵬
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: A61K47/64
• 分類號: A61K47/64;A61K31/716;A61K35/15;A61P37/04;A61P35/00;C08B37/02
• 代理公司: 北京碩慧云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 16000
• 代理人: 郭英委

1.一種β-葡聚糖與M2巨噬細胞靶向肽偶聯物，其特征在于，所述β-葡聚糖與M2巨噬細胞靶向肽偶聯物的結構如下：

其中所述糖肽偶聯物結構式中n＝1～50，m＝1-10。

2.一種如權利要求1所述的β-葡聚糖與M2巨噬細胞靶向肽偶聯物的制備方法，其特征在于：

(1)首先對β-葡聚糖還原端進行氨基修飾，將末端帶有胺基的二酰肼、二酰胺等連接臂通過還原胺化反應，連接到β-葡聚糖還原末端，得到末端胺基的β-葡聚糖衍生物(BG-R-NH₂)；

(2)然后再將末端帶有馬來酰亞胺的NHS活潑酯通過酰胺反應，與末端胺基的β-葡聚糖衍生物反應形成酰胺鍵，得到末端馬來酰亞胺的β-葡聚糖衍生物(BG-Mal)；

(3)最終利用M2型巨噬細胞靶向肽末端巰基通過高效Click反應與末端馬來酰亞胺的β-葡聚糖衍生物共價偶聯，得到β-葡聚糖還原末端與M2型巨噬細胞靶向肽共價偶聯的糖肽偶聯物(BG-MP)。

3.根據權利要求2所述β-葡聚糖與M2巨噬細胞靶向肽偶聯物的制備方法，其特征在于，所述β-葡聚糖與M2巨噬細胞靶向肽偶聯物的具體制備步驟如下：

(1)將β-葡聚糖(BG)與連接臂己二酸二酰肼(ADH)溶解于二甲亞砜/乙酸混合反應溶劑中，氮氣保護下，于60℃水浴中反應1小時，隨后加入氰基硼氫化鈉(NaBH₃CN)，繼續反應48小時，反應結束后，加入等體積氯化鈉鹽溶液，混勻，加入4倍體積無水乙醇醇沉，離心10分鐘，沉淀再次加氯化鈉溶液只剛好溶解沉淀，繼續醇沉，反復3次后收集沉淀，透析48小時后經減壓濃縮后經冷凍干燥即可得β-葡聚糖還原末端帶有氨基的β-葡聚糖衍生物(BG-ADH)。

(2)將上述得到的β-葡聚糖衍生物(BG-ADH)與末端帶有馬來酰亞胺的NHS活潑酯(sulfo-SMCC)溶解在PBS緩沖溶液中，氮氣保護下，于40℃水浴中反應3小時，反應結束后，加入等體積氯化鈉鹽溶液，反復醇沉3次后收集沉淀，透析后經濃縮、凍干即可得β-葡聚糖還原末端馬來酰亞胺基團的β-葡聚糖衍生物(BG-SMCC)。

(3)將上述得到的β-葡聚糖衍生物(BG-SMCC)與M2型巨噬細胞靶向肽(M2pep)溶解于DMSO/DMF混合溶劑中，氮氣保護下，于40℃水浴中反應4小時，反應結束后，加入等體積氯化鈉鹽溶液，反復醇沉3次后收集沉淀，透析后經濃縮、凍干即可得β-葡聚糖還原末端與M2型巨噬細胞靶向肽共價偶聯的糖肽偶聯物(BG-MP)。

4.根據權利要求3所述的β-葡聚糖與M2巨噬細胞靶向肽偶聯物的制備方法，其特征在于：β-葡聚糖分子量為0.1kDa～100kDa，單糖組成以葡萄糖為主比例在95％以上，其連接方式為主鏈由葡萄糖通過β-1,3糖苷鍵連接而成，同時在主鏈上具有β-1,6分支，分支度為1％～60％。

5.根據權利要求3所述的β-葡聚糖與M2巨噬細胞靶向肽偶聯物的制備方法，其特征在于：所選肽為M2型巨噬細胞靶向肽(M2pep)和含有M2型巨噬細胞靶向肽活性片段(YWWKVGWPDQWY)的其他肽類藥物類似物。

6.根據權利要求3所述的β-葡聚糖與M2巨噬細胞靶向肽偶聯物的制備方法，其特征在于：所述β-葡聚糖與M2型巨噬細胞靶向肽中間的連接鏈特征為鏈兩端為氨基、酰肼基，中間有2個碳到12個碳的長度，包括二酰肼類、二胺類化合物。

7.根據權利要求3所述的β-葡聚糖與M2巨噬細胞靶向肽偶聯物的制備方法，其特征在于：所述β-葡聚糖與M2型巨噬細胞靶向肽中間的連接鏈特征為鏈一端為NHS活潑酯，另一端為帶馬來酰亞胺，中間有2個碳到12個碳的長度，包括N-羥基琥珀酰亞胺-R-馬來酰亞胺(Mal-R-NHS)類。

8.如權利要求1-7任意一項所述β-葡聚糖與M2巨噬細胞靶向肽偶聯物在抗腫瘤的藥物、保健品以及特殊醫學用途配方食品中的用途；在重塑腫瘤微環境中的用途。