[發(fā)明專利]降低NR5A2基因表達(dá)的siRNA、重組載體及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211372730.5
• 申請(qǐng)日: 2022-11-04
• 公開（公告）號(hào): CN115960897A
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周敏;張小蒙;張曼;孫菊;郭焱;裴冬;商干偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鹽城市第三人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/867;A61K31/7105;A61P35/00
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本發(fā)明屬于分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種降低NR5A2基因表達(dá)的siRNA、重組載體及其應(yīng)用。具體地，涉及一種siRNA，所述siRNA特異性地降低NR5A2基因表達(dá)。由于本發(fā)明提供的siRNA能夠特異性地降低NR5A2基因表達(dá)，使得該siRNA可應(yīng)用于制備治療和/或預(yù)防胰腺癌的藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種降低NR5A2基因表達(dá)的siRNA、所述siRNA對(duì)應(yīng)的shRNA、編碼所述shRNA的DNA，包括該DNA的重組載體，包括該重組載體的重組慢病毒，包括所述siRNA、shRNA、編碼shRNA的DNA、重組載體和重組慢病毒的宿主細(xì)胞，以及它們的應(yīng)用。

背景技術(shù)

胰腺癌是消化道常見惡性腫瘤之一，在腫瘤領(lǐng)域素有“癌癥之王”的稱號(hào)。據(jù)柳葉刀雜志記載，胰腺癌確診后的五年生存率約10%，是預(yù)后最差的惡性腫瘤之一。

胰腺癌臨床癥狀隱匿且不典型，是診斷和治療都很困難的消化道惡性腫瘤，約90%為起源于腺管上皮的導(dǎo)管腺癌。其發(fā)病率和死亡率近年來明顯上升。胰腺癌早期的確診率不高，手術(shù)死亡率較高，而治愈率很低。胰腺癌發(fā)病率男性高于女性，男女之比為1.5～2:1，男性患者遠(yuǎn)較絕經(jīng)前的婦女多見，絕經(jīng)后婦女的發(fā)病率與男性相仿。

胰腺癌由于惡性程度高，手術(shù)切除率低，預(yù)后不良。盡管手術(shù)仍然是首要的治療方法，但由于胰腺癌常常發(fā)現(xiàn)較晚，而喪失根治的機(jī)會(huì)，因此需要對(duì)胰腺癌進(jìn)行綜合治療。迄今同大多數(shù)腫瘤一樣，還沒有一種高效和可完全應(yīng)用的綜合治療方案。現(xiàn)在的綜合治療仍然是以外科治療為主，放療、化療為輔，并在探討結(jié)合免疫和分子等生物治療的新方法。

NR5A2?(nuclear?receptor?subfamily?5,?group?A,?member?2)，核受體亞家族5,?組A,?成員2，是一種轉(zhuǎn)錄因子，主要參與調(diào)控轉(zhuǎn)錄、形態(tài)發(fā)生、穩(wěn)態(tài)等過程。NR5A2也是一種激活炎癥的開關(guān)，目前已鑒定出這個(gè)基因的變體會(huì)增加胰腺癌風(fēng)險(xiǎn)。Bailey等對(duì)456例胰腺癌病人進(jìn)行了整合基因組和RNA序列分析，并將胰腺癌分為4種亞型：鱗狀細(xì)胞型、胰腺起源型、異常內(nèi)分泌分化的外分泌型以及免疫原型。其中異常內(nèi)分泌分化的外分泌型（ADEX）的特征是轉(zhuǎn)錄因子如NR5A2、RBPJL和MIST1的上調(diào)，這些轉(zhuǎn)錄因子的下游靶點(diǎn)在胰腺炎發(fā)生后的腺泡細(xì)胞分化和再生過程中，以及在內(nèi)分泌分化相關(guān)的基因表達(dá)中起關(guān)鍵作用，基于以上論述，結(jié)合現(xiàn)有治療手段仍不能滿足臨床胰腺癌個(gè)體化治療需求的現(xiàn)狀，基于NR5A2的開發(fā)和應(yīng)用勢(shì)在必行。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種降低NR5A2基因表達(dá)的siRNA、重組載體及其應(yīng)用，以特異性地降低NR5A2基因表達(dá)，從而能夠治療和/或預(yù)防胰腺癌。

本發(fā)明第一方面是的提供一種siRNA，所述siRNA特異性地降低NR5A2基因表達(dá)。

具體地，本發(fā)明的重點(diǎn)在于提供新的胰腺癌治療靶標(biāo)，而不限于具體的siRNA序列，可以根據(jù)本領(lǐng)域常規(guī)的各種方法設(shè)計(jì)針對(duì)該靶標(biāo)的siRNA。所述siRNA通常具有19～27bp的核苷酸序列。

具體地，所述siRNA的核苷酸序列至少包括以下一組核苷酸序列：

(1)第一組核苷酸序列

所述第一組核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2所示，所述SEQ?ID?NO:1為5'-GCACUGCACCGAUUUAAGCUA-3'，所述SEQ?ID?NO:2為5'-GUGCUAAGGGAUCACUCUAGU-3'；

?(2)第二組核苷酸序列

所述第二組核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4所示，所述SEQ?ID?NO:3為5'-CUAAGACAAGGUUGUCCAUCC-3'，所述SEQ?ID?NO:4為5'-UACCGCGAUGGUGAACUUAGU-3'；

(3)第三組核苷酸序列