[發(fā)明專利]M0或M1型Ly6C+CX3CR1+單核細胞來源巨噬細胞在治療肝纖維化中的用途

在審

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• 申請日: 2022-11-01
• 公開（公告）號: CN115671136A
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發(fā)明（設計）人: 劉成海;胡旭東;幸鷺;平大冰;孫鑫;彭淵;陶艷艷
• 申請（專利權）人: 上海中醫(yī)藥大學附屬曙光醫(yī)院;上海中醫(yī)藥大學
• 主分類號: A61K35/15
• 分類號: A61K35/15;A61P1/16;C12N5/0786
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 趙建敏

本發(fā)明提供了M0或M1型Ly6C⁺CX3CR1⁺單核細胞來源巨噬細胞在制備肝纖維化藥物中的用途。通過實驗證實，M0和M1型CD45⁺F4/80⁺CD11b⁺Ly6C⁺CX3CR1⁺CCR2⁺BMDM和CD45⁺F4/80⁺CD11b⁺Ly6C⁺CX3CR1⁺CCR2?BMDM四群細胞均能有效改善四氯化碳肝纖維化小鼠的體重及臟器指數(shù)(降低肝體比及脾體比)、減輕炎癥反應并減輕肝纖維化程度，證實這四群細胞均能顯著減輕肝臟炎癥和肝纖維化程度，對于肝損傷后再生起到積極的輔助作用，為肝纖維化的治療提供了一種新的途徑。

技術領域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域，涉及M0或M1型Ly6C⁺CX3CR1⁺單核細胞來源巨噬細胞在制備肝纖維化藥物中的用途、該巨噬細胞的制備方法以及含有該巨噬細胞的藥物組合物。

背景技術

肝硬化在我國人群中發(fā)病率高達0.51％，全國目前約有700萬肝硬化患者，其中每年1-8％的患者進展到肝細胞癌，肝硬化疾病嚴重威脅人民生命健康。肝硬化可由多種病因引起，包括：HBV和HCV感染、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、自身免疫性肝病、遺傳和代謝性疾病、藥物或化學毒物等、寄生蟲感染、循環(huán)障礙等，這些病因?qū)е陆】蹈渭毎M織和肝臟結構逐漸喪失，肝臟出現(xiàn)彌漫性纖維化、假小葉形成以及肝內(nèi)外血管增殖。如果清除了導致肝損傷的因素(如病毒、酒精)，肝纖維化可以部分逆轉(zhuǎn)，從而使肝再生得以發(fā)生。

實驗性肝損傷后肝再生的動物模型表明，巨噬細胞在控制和修復纖維化肝病中起著關鍵作用。肝臟修復可以通過由骨髓單核細胞分化而來的巨噬細胞進行治療，但未分化的骨髓單核細胞沒有治療效應。巨噬細胞治療可以通過調(diào)節(jié)肝星狀細胞凋亡和增加抗炎細胞因子的產(chǎn)生來減輕四氯化碳(CCL4)介導的肝損傷。此外，巨噬細胞介導的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)釋放和吞噬作用對于纖維化瘢痕的解決至關重要。巨噬細胞還能夠通過Wnt和TWEAK信號刺激肝祖細胞增殖、分化和補充丟失的肝細胞。因此，過繼性巨噬細胞治療為肝硬化患者提供了一種重要的潛在治療策略，以促進纖維化的消退。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明依托上述研究進行，目的在于提供一種M0或M1型Ly6C⁺CX3CR1⁺單核細胞來源巨噬細胞、其制備方法及在制備肝纖維化藥物中的用途，還提供了包含該巨噬細胞的藥物組合物。

本發(fā)明的第一方面，提供了一種M0或M1型Ly6C⁺CX3CR1⁺單核細胞來源的巨噬細胞。優(yōu)選的，該巨噬細胞包括M0或M1型CD45⁺F4/80⁺CD11b⁺Ly6C⁺CX3CR1⁺CCR2⁺單核細胞來源巨噬細胞、M0或M1型CD45⁺F4/80⁺CD11b⁺Ly6C⁺CX3CR1⁺CCR2-單核細胞來源巨噬細胞四種細胞。

上述巨噬細胞的制備方法概述如下：從骨髓細胞中分離單核細胞，體外以巨噬細胞誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)7天后，再以不加刺激劑的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時獲得M0型單核細胞來源巨噬細胞(BMDM)，以加脂多糖(LPS)+干擾素γ(IFNγ)刺激劑的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時獲得M1型BMDM。

具體的，本發(fā)明所述巨噬細胞分別從野生型C57小鼠和CCR2^-/-C57小鼠的骨髓細胞培養(yǎng)并誘導分化后獲取得到，制備方法如下：