[發(fā)明專利]用于檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的KASP標記引物組合及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211357614.6
• 申請日: 2022-11-01
• 公開（公告）號: CN116179745A
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發(fā)明（設計）人: 金炳奎;王昌盛;劉金寶;王海艷;曹亞婕;由守昌;楊猛
• 申請（專利權）人: 優(yōu)奈爾生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;A01H1/02;C12N15/11
• 代理公司: 山東濟南齊魯科技專利事務所有限公司 37108
• 代理人: 張德平

1.用于檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的KASP標記引物組合，其特征在于：所述西瓜紅/黃瓤色性狀的控制基因為RYC基因，所述KASP標記引物組合包括如下三條引物：

上游引物1的核心序列：

5'-gccattgttcttgatgccactggcg-3'；

上游引物2的核心序列：

5'-gccattgttcttgatgccactggct-3'；

下游引物的序列；

5'-ccacctcagctaaaatcccataagctacc-3'。

2.根據權利要求1所述的用于檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的KASP標記引物組合，其特征在于：所述KASP標記引物組合包括如下三條引物：

上游引物1的序列：

5'-gaaggtgaccaagttcatgctgccattgttcttgatgccactggcg-3'；

上游引物2的序列：

5'-gaaggtcggagtcaacggattgccattgttcttgatgccactggct-3'；

下游引物的序列：

5'-ccacctcagctaaaatcccataagctacc-3'。

3.用于檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的KASP標記引物組合的應用，其特征在于：所述應用：采用KASP標記引物組合進行檢測西瓜紅/黃瓤色性狀，包括以下步驟：

(1)提取待測西瓜品種基因組DNA；

(2)使用含有檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的KASP標記引物對西瓜基因組DNA進行PCR擴增；

(3)根據PCR熒光信號的差異，利用軟件進行分析，進而鑒別出每個待測西瓜的基因型，即鑒定出屬于純合GG、TT，雜合GT基因型的西瓜品種。

4.根據權利要求3所述的用于檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的KASP標記引物組合的應用，其特征在于：

所述PCR擴增：采用的PCR反應體系為：20-100ng/μL西瓜基因組DNA?2.5μL，KASPMaster?Mix?2.5μL，Primer?mix0.075μL，共5.075μL。

5.根據權利要求3所述的用于檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的KASP標記引物組合的應用，其特征在于：所述Primer?mix：將上游引物1、上游引物2、下游引物分別用ddH₂O稀釋到50μM后，再將上游引物1、上游引物2、下游引物按照1:1:3的摩爾濃度比例混合。

6.根據權利要求3所述的用于檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的KASP標記引物組合的應用，其特征在于：

所述PCR擴增反應的反應程序為：95℃預變性10min；95℃15s；61℃45s，共10個循環(huán)，每個循環(huán)降0.6℃；95℃15s，55℃1min，共34個循環(huán)。

7.用于檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的KASP標記引物組合的應用，其特征在于：所述應用：培育具有西瓜黃瓤色性狀的新植株。

8.根據權利要求書7所述的用于檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的KASP標記引物組合的應用，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1、以受體親本P1，與供體親本P2配制F1代雜交組合；再以受體親本P1作為輪回親本進行回交，獲得BC1F1代回交分離群體；

步驟2、對所述BC1F1代回交分離群體，采用KASP標記引物組合進行檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的方法進行基因型檢測，選取基因型為TT的單株繼續(xù)回交，獲得BC2F1代回交分離群體；

步驟3、對所述BC2F1代回交分離群體，采用KASP標記引物組合進行檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的方法進行基因型檢測，選取基因型為TT的單株，繼續(xù)回交n代，獲得BCnF1代回交分離群體，所述n為3-8；

步驟4、對BCnF1代回交分離群體，采用KASP標記引物組合進行檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的方法進行基因型檢測，選取基因型為TT的單株自交。

9.根據權利要求書8所述的用于檢測西瓜紅/黃瓤色性狀的KASP標記引物組合的應用，其特征在于：所述n為4。