[發明專利]利用專性噬菌體提升生防菌防控土傳青枯病的方法

在審

• 申請號: 202211355301.7
• 申請日: 2022-11-01
• 公開（公告）號: CN115651867A
• 公開（公告）日: 2023-01-31
• 發明（設計）人: 韋中;王孝芳;侯如嬌;楊可銘;徐陽春;沈其榮
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N7/00;A01N63/40;A01N63/20;A01P1/00;A01G13/00;A01G22/05;C12R1/01
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 邢賢冬;徐冬濤

本發明公開了一株青枯病生防菌YL?Ste?01evo，保藏號為CCTCC NO:M2022939；一株青枯病生防菌YL?Ste?01，保藏號為CCTCCNO:M2022324；一株裂解性噬菌體YL?Ste?01P，保藏號為CCTCC NO:M2022460。本發明公開了生防菌YL?Ste?01evo或生防菌YL?Ste?01或生防菌YL?Ste?01evo協同噬菌體YL?Ste?01P在防控番茄土傳青枯病的應用。生防菌YL?Ste?01可以顯著抑制青枯菌的生長，降低番茄植株青枯病發病率；通過噬菌體脅迫YL?Ste?01進化獲得噬菌體抗性更強但抑菌效果更佳的生防菌YL?Ste?01evo。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，涉及利用專性噬菌體提升生防菌防控土傳青枯病的應用，具體涉及一株生防菌YL-Ste-01，一株專性靶向宿主細菌YL-Ste-01的裂解性噬菌體YL-Ste- 01P，一株進化后的生防菌YL-Ste-01evo，以及生防菌YL-Ste-01或生防菌YL-Ste-01evo或生防菌YL-Ste-01evo協同噬菌體YL-Ste-01P在防控番茄土傳青枯病的應用。

背景技術

由茄科勞爾氏菌(Ralstonia solanacearum，簡稱青枯菌)引起的土傳青枯病嚴重制約了農業的可持續發展，常年來給農戶造成了嚴重的損失。物理和化學防控方式雖然見效快，但易誘導病原菌的耐藥性，且使用過程中因靶向性不強，殺滅青枯菌的同時也破壞了微生物群落。利用根際微生物防控土傳病害已經成為新型環保的生防手段^[1]，如有益生防菌、噬菌體、原生動物等。其中，噬菌體是一種專性侵染細菌的病毒，有研究表明青枯菌的專性噬菌體在防控土傳青枯病的過程中發揮重要作用。根際除了病原菌專性噬菌體，還存在大量生防菌的噬菌體。但根際生防菌的專性噬菌體影響生防菌消減效率的研究相對較少。作為細菌的專性“殺手”，噬菌體可以有效調控根際生防菌的種群密度、生理和行為；同時作為細菌進化的重要驅動力，噬菌體在誘導宿主細菌抗性進化的同時也會改變宿主細菌的其他生活史特征，如生防菌的生長、運動和代謝等^[2]，進而影響生防菌的根際定殖、競爭能力。是否可以利用生防菌的專性噬菌體來定向馴化生防菌，增強其消減土壤青枯菌生物障礙的效率尚不清楚，有待進一步研究。

發明內容

本發明的目的在于從番茄植株根際分離得到一株可以抑制青枯菌的生防菌YL-Ste-01，并篩選得到一株專性侵染生防菌YL-Ste-01的噬菌體YL-Ste-01P，發明人發現：噬菌體脅迫下，生防菌YL-Ste-01發生進化，對青枯菌抑制能力增強且對噬菌體的抗性增強，從而進一步篩選得到一株抑制青枯菌的生防菌YL-Ste-01evo，通過溫室盆栽實驗表明，施用進化菌株 YL-Ste-01evo可以顯著提高防控番茄青枯病的效果。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

一株青枯病生防菌YL-Ste-01evo，分類命名為嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)，于2022年6月21日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M2022939。

一株青枯病生防菌YL-Ste-01，分類命名為嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)，于2022年3月28日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M2022324。

一株裂解性噬菌體YL-Ste-01P，屬于有尾噬菌體目，長尾噬菌體科，分類命名為嗜麥芽窄食單胞菌噬菌體(Stenotrophomonas maltophilia phage)，于2022年4月22日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M 2022460。