[發(fā)明專利]一種阿留申、腸炎、犬瘟熱病檢測(cè)的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211336069.2
• 申請(qǐng)日: 2022-10-28
• 公開（公告）號(hào): CN115612753A
• 公開（公告）日: 2023-01-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 溫建新;徐航;曹志;任建煒
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京卓勝佰達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 16026
• 代理人: 劉冬梅

1.一種水貂阿留申、腸炎、犬瘟熱病毒三重TaqMan熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法，其步驟包括：

(1)樣品采集與制備

(2)病毒核酸提取

(3)取反應(yīng)體系管置于室溫融化，用移液器吸取模板2μL加入反應(yīng)體系管中，用離心機(jī)離心30s，離心結(jié)束放入熒光定量PCR儀器中，使用程序進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水貂阿留申、腸炎、犬瘟熱病毒三重TaqMan熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法，其特征在于，樣品采集過程具體操作為：將拭子用無菌生理鹽水沾濕，收集眼鼻肛門分泌物樣品，再將拭子插入無菌生理鹽水采樣管中，渦旋震蕩混勻，取上清液200μL于1.5ml PCR反應(yīng)管中；糞便提取方法為取少量糞便，按1：10的比例加入生理鹽水混勻后12000rpm離心，取200μL上清液于1.5ml PCR反應(yīng)管中。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水貂阿留申、腸炎、犬瘟熱病毒三重TaqMan熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法，其特征在于，擴(kuò)增程序?yàn)槌绦驗(yàn)?7℃180s；95℃120s；95℃10s，52℃30s，40個(gè)循環(huán)。

4.一組用于水貂阿留申、腸炎、犬瘟熱病毒三重TaqMan熒光定量RT-PCR檢測(cè)的探針和引物，其特征在于，所述探針與引物的核苷酸序列為SEQ ID No.1，SEQ ID No.2，SEQ IDNo.3，SEQ ID No.4，SEQ ID No.5，SEQ ID No.6，SEQ ID No.7，SEQ ID No.8，SEQ ID No.9.

5.如權(quán)利要求4所述探針與引物在水貂阿留申、腸炎、犬瘟熱病毒檢測(cè)中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求1所述的三重TaqMan熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法在水貂阿留申、腸炎、犬瘟熱病毒檢測(cè)中的應(yīng)用。