[發明專利]絨毛狼尾草組織培養方法及應用

有效

• 申請號: 202211322714.5
• 申請日: 2022-10-27
• 公開（公告）號: CN115362939B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: 鄧國賓;楊軍文;曾祥飛;趙露琴;李佳康;董麗秀;張文娟;鄧重梨
• 申請（專利權）人: 西南林業大學;云南植蟲藥生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明盈正知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 53208
• 代理人: 徐洪剛

本發明涉及植物組織培養技術領域，具體來說是絨毛狼尾草組織培養方法及應用，步驟包括：外植體選擇與清洗；洗凈外植體轉移至超凈工作臺，依次用酒精、飽和漂白粉溶液、升汞溶液消毒；消毒好外植體剪去兩端傷口，接種于叢生芽誘導培養基中光暗交替下培養；誘導出叢生芽剪成單芽，接種于叢生芽增殖培養基中光暗交替下培養；增殖叢生芽剪成單芽，接種于叢生芽生根培養基中光暗交替下培養，后轉移至室溫培養。本發明方法目前在火焰狼尾草以及紫葉狼尾草我國引進的兩個園藝栽培變種均能通用。

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，具體來說是絨毛狼尾草組織培養方法及應用。

背景技術

絨毛狼尾草（Pennisetum setaceum）為禾本科狼尾草屬多年生草本植物，原產于北非，具有喜光，耐高溫，耐寒，耐旱以及耐貧瘠，但不耐蔭蔽等特性，在黏土、砂土、酸性土或弱堿性土等都能較好的生長，且生長健壯，同時由于其養護管理簡單、具有景觀效果、自然質樸等特性，而各園藝栽培變種具有株型優美、花絮美麗等優點，深受園藝學家及園林設計師的青睞。

目前我國引進的絨毛狼尾草園藝栽培變種主要有火焰狼尾草、紫葉狼尾草兩種，由于絨毛狼尾草大部分園藝栽培種具有不結實的特性，因此其不能進行種子繁殖，使得目前絨毛狼尾草主要靠分株繁殖，但分株繁殖存在繁殖系數低、繁殖周期長、病蟲害積累、長期分株易導致品種退化等缺點。

近年來，我國各科研院所及企業，逐步開展了絨毛狼尾草品種的組培技術研究，但現有技術均存在在不同園藝栽培變種間不能互用的缺點，同時即使在原栽培種下，亦存在消毒技術欠佳、增殖系數低、馴化成活率低等缺點。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，特發明了一種絨毛狼尾草的組織培養方法。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：一種絨毛狼尾草組織培養方法，所述絨毛狼尾草為火焰狼尾草或紫葉狼尾草，包括如下步驟：

（1）外植體選擇與清潔：選擇絨毛狼尾草莖段，將其剪成2～3cm具芽小段，用自來水洗凈表面泥土，后滴加4～5滴洗潔精，涮洗10～15min，后用自來水洗去表面洗潔精；

（2）外植體消毒：洗凈外植體轉移至超凈工作臺，用75%酒精消毒15～20s，無菌水涮洗2～3次，飽和漂白粉溶液消毒15～20min，無菌水涮洗4～5次，0.05%升汞溶液消毒10～11min，無菌水涮洗7～8次；

（3）叢生芽誘導：消毒好外植體用無菌紙吸去表面水分，并剪去兩端傷口，接種于N6+NAA 0.2～0.3mg/L+2,4-D 0.02～0.04mg/L+TDZ 1.0～1.5mg/L+2-IP 0.1～0.2mg/L+活性炭 0.5g/L的叢生芽誘導培養基中，在溫度25±2℃，每日照光12h，光強2000～3000lx的光暗交替下培養30～35天；

（4）叢生芽增殖：誘導出叢生芽剪成單芽，接種于改良N6+NAA 0.1～0.2mg/L+TDZ0.5～0.8mg/L+CPPU 0.2～0.3mg/L+香蕉泥 50～60g/L的叢生芽增殖培養基中，在溫度25±2℃，每日照光12h，光強2000～3000lx的光暗交替下培養25～30天；

（5）叢生芽生根：增殖叢生芽剪成單芽，接種于改良N6+NAA 0.4～0.5mg/L+IBA0.5～0.8mg/L+KT 0.5～0.8mg/L+GA3 0.3～0.5mg/L+椰汁40～50ml/L+活性炭 0.5g/L的叢生芽生根培養基中，在溫度25±2℃，每日照光12h，光強3000～4000lx的光暗交替下培養15～20天，后轉移至遮陰率80%左右的日光下室溫培養5～10天。

上述所述N6培養基為在原N6的基礎上，硝酸鉀改為165mg/L，磷酸二氫鉀改為50mg/L，硫酸銨改為70mg/L，氯化鈣改為20mg/L，同時添加脯氨酸200mg/L，其余物質不變。

本發明的有益技術效果是：