[發明專利]PCK-1在作為海洋生物細菌病原感染的血清分子標志物的應用

在審

• 申請號: 202211317997.4
• 申請日: 2022-10-26
• 公開（公告）號: CN115856299A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 邱麗梅;尹肖婷;劉青;張偉倩;王森宇
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/569;G01N33/58;G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 高笑;何薇

本發明涉及分子生物學，具體地說是PCK?1作為海水養殖生物細菌病原感染的血清分子標志物中的應用。本發明利用抗原抗體結合的特異性，以血清中PCK?1蛋白含量為指標有效區分細菌性病原感染群體和健康群體。發明首次提出使用血清中分子標志物PCK?1為感染狀態評價指標，實現了檢測的有效性和特異性，對改善我國海洋養殖生物健康狀況的診斷現狀，和促進海洋生物養殖健康具有重要意義。

技術領域

本發明涉及分子生物學，具體地說是一種PCK-1在作為海洋生物細菌病原感染的血清分子標志物中的應用。

背景技術

隨著我國海洋生物養殖業迅速發展和集約化程度不斷提高，海洋生物細菌性病原感染的發生也日益嚴重。自20世界90年代初以來，每年大約有十分之一養殖面積的海水養殖品發生細菌性病害，一些主要的水產養殖品種如對蝦、鰻魚、中華鱉和扇貝等相繼爆發細菌感染疾病，由此造成的直接和間接的經濟損失達上百億元。細菌性病害的有效防治有賴于對細菌性病原的準確、快速檢測和診斷。借助于養殖品種外形變異、組織病理或者超微結構等方法來觀察或者診斷海洋生物病害感染往往費時、費力、成本高昂，準確性又欠佳；同時海洋生物細菌性病原感染的檢測手段僅僅依賴于一些傳統的生物學和化學方法，其特異性及靈敏性較低。因而，探究海洋生物細菌性病原感染發生的早期敏感分子，篩選易感生物標志物(susceptible biomaker)可為細菌性病害的診斷和實施干預提供有效手段，對于促進海洋生物養殖健康具有重大的科學意義。

鑒于目前海洋生物細菌性病原感染診斷的血清分子標志物較少的現狀，本發明開發血清分子標志物PCK-1。

發明內容

為了彌補現有技術的不足，本發明的目的是在于提供一種PCK-1在作為海洋生物細菌性病原感染的血清分子標志物中的應用。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種PCK-1在作為海洋生物細菌性病原感染的血清分子標志物中的應用。

所述PCK-1蛋白在作為海洋生物細菌性病原感染的血清分子標志物中的應用。

所述PCK-1蛋白可通過分子克隆的方法重組獲得：首先利用PCR技術獲得目標序列，進而連接表達載體PET-28a(+)，成功轉化表達細胞BL21(DE3)后誘導表達蛋白，最終利用Ni-NTA柱得到純化蛋白。其為磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶家族成員。

所述細菌為富含脂多糖成分的細菌；如燦爛弧菌、鰻弧菌、大腸桿菌等革蘭氏陰性菌。

一種血清分子標志物的試劑盒，試劑盒中含所述的PCK-1蛋白的抗體。

所述試劑盒含有抗原-抗體顯色反應試劑；具體為，100mM碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液，每孔每次100μl；PBS-T，每孔每次200μl；抗PCK-1的多克隆抗體(1:1000，每孔每次100μl)；HPR標記的羊抗小鼠IgG(1:1000；每孔每次100μl)；TMB溶液，每孔每次100μl；2M硫酸溶液，每孔每次50μl。

所述抗體為抗PCK-1的多克隆抗體；具體為：利用上述所述PCK-1蛋白免疫小鼠四次，最終獲得的多克隆抗體血清。

一種試劑盒的應用，所述試劑盒在用于診斷海洋生物細菌性病原感染中的應用。

利用所述試劑盒基于ELISA在用于診斷海洋生物細菌性病原感染中的應用。

本發明所具有的優點：

本發明首次發現了血清中PCK-1蛋白針對細菌病原的表達特異性，可為細菌性病原感染的診斷提供了候選分子，并建立了基于ELISA(enzyme linked immunosorbentassay，酶聯免疫吸附測定)技術的檢測方法，該方法可及時檢測待檢生物的感染狀態，為快速、簡便的診斷海洋生物細菌感染情況提供有效的技術保障。