[發明專利]新型的Cas12酶和系統以及應用

在審

• 申請號: 202211314702.8
• 申請日: 2022-10-26
• 公開（公告）號: CN116218816A
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 李珊珊;孫潔;趙慶芝;劉銳恒
• 申請（專利權）人: 山東舜豐生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/22
• 分類號: C12N9/22;C12N15/55;C12N15/113;C12N15/63;C12Q1/6816
• 代理公司: 北京君慧知識產權代理事務所(普通合伙) 11716
• 代理人: 劉曉佳

1.一種Cas蛋白，其特征在于，所述Cas蛋白為以下I-III任一所述的Cas蛋白：

I、Cas蛋白的氨基酸序列與SEQ?ID?No.1或SEQ?ID?No.4相比，具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少99.1％、至少99.2％、至少99.3％、至少99.4％、至少99.5％、至少99.6％、至少99.7％、至少99.8％、或至少99.9％的序列同一性，并且基本保留了其源自的序列的生物學功能；

II、所述Cas蛋白的氨基酸序列與SEQ?ID?No.1或SEQ?ID?No.4相比，具有一個或多個氨基酸的置換、缺失或添加的序列，并且基本保留了其源自的序列的生物學功能；

III、所述Cas蛋白包含SEQ?ID?No.1或SEQ?ID?No.4所示的氨基酸序列。

2.一種融合蛋白，所述融合蛋白包括權利要求1所述的Cas蛋白和其他的修飾部分。

3.一種分離的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸為編碼權利要求1所述Cas蛋白的多核苷酸序列，或編碼權利要求2所述融合蛋白的多核苷酸序列。

4.一種gRNA，其特征在于，所述gRNA包括能夠結合權利要求1所述的Cas蛋白的同向重復序列和能夠靶向靶序列的引導序列。

5.一種同向重復序列，其特征在于，所述同向重復序列包含SEQ?ID?No.7-8任一所示的序列。

6.一種載體，其特征在于，所述載體包含權利要求3所述的多核苷酸以及與之可操作連接的調控元件。

7.一種CRISPR-Cas系統，其特征在于，所述系統包括權利要求1所述的Cas蛋白以及至少一種權利要求4所述的gRNA。

8.一種載體系統，其特征在于，所述載體系統包括一種或多種載體，該一種或多種載體包括：

a)第一調控元件，該第一調控元件可操作地與權利要求4所述的gRNA連接，

b)第二調控元件，該第二調控元件可操作地與權利要求1所述的Cas蛋白連接；

其中組分(a)和(b)位于該系統的相同或不同載體上。

9.一種組合物，其特征在于，所述組合物包含：

(i)蛋白組分，其選自：權利要求1所述的Cas蛋白或權利要求2所述的融合蛋白；

(ii)核酸組分，其選自：權利要求4所述的gRNA，或編碼權利要求4所述的gRNA的核酸，或權利要求4所述的gRNA的前體RNA，或編碼權利要求4所述的gRNA的前體RNA核酸；

所述蛋白組分與核酸組分相互結合形成復合物。

10.一種活化的CRISPR復合物，所述活化的CRISPR復合物包含：

(i)蛋白組分，其選自：權利要求1所述的Cas蛋白或權利要求2所述的融合蛋白；

(ii)核酸組分，其選自：權利要求4所述的gRNA，或編碼權利要求4所述的gRNA的核酸，或權利要求4所述的gRNA的前體RNA，或編碼權利要求4所述的gRNA的前體RNA核酸；

(iii)結合在權利要求4所述的gRNA上的靶序列。

11.一種工程化的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞包含權利要求1所述的Cas蛋白，或權利要求2所述的融合蛋白，或權利要求3所述的多核苷酸，或權利要求6所述的載體，或權利要求7所述的CRISPR-Cas系統，或權利要求8所述的載體系統，或權利要求9所述的組合物，或權利要求10所述的活化的CRISPR復合物。