[發明專利]一種赤霉素GA4的發酵工藝

在審

• 申請號: 202211304462.3
• 申請日: 2022-10-24
• 公開（公告）號: CN115491401A
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發明（設計）人: 聶志奎;黃和;施天穹;周金龍;諶鵬飛;周圣驕;聶波;廖海兵
• 申請（專利權）人: 江西新瑞豐生化股份有限公司;南京師范大學
• 主分類號: C12P27/00
• 分類號: C12P27/00;C12R1/77
• 代理公司: 昆明合眾智信知識產權事務所 53113
• 代理人: 周體輝

1.一種赤霉素GA4的發酵工藝，其中涉及一株產赤霉素GA4的菌株，該菌株分類命名為：藤倉赤霉(Fusarium fujikuroi)NRF01，已于2022年5月19日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC NO.M2022683)，其特征在于：發酵過程采取分階段控制發酵條件，流加補糖控制發酵液總糖濃度在0.5-1.0％，流加補氮源控制發酵液氨基氮濃度在70-126mg/L，發酵5-7天，赤霉素GA4發酵水平為2186mg/L。

2.如權利要求1所述一種赤霉素GA4的發酵工藝，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將斜面用接種刀刮長寬各1cm左右藤倉赤霉(Fusarium fujikuroi)NRF01菌塊，接種至含有種子培養基的搖瓶中，種子培養基組成成分為，葡萄糖2.0-5.0％，黃豆餅粉1.0-3.0％，花生餅粉0.8-1.5％，糊精2.0-4.0％，KH2PO40.08-0.16％，(NH4)2SO40.01-0.03％，MgSO4.7H2O 0.05-0.15％，溫度28-30℃，搖床轉速300-400rpm，培養24-48小時，得到藤倉赤霉(Fusariumfujikuroi)NRF01活化種子液150mL；

(2)將活化的種子液150mL接種至含有種子培養基的50L發酵罐中(30L/50L)，種子培養基組成成分為，葡萄糖2.0-4.0％，黃豆餅粉1.5-2.5％，花生餅粉1.0-2.0％，糊精2.0-4.0％，KH₂PO₄0.10-0.20％，(NH₄)2SO₄0.02-0.04％，MgSO₄.7H₂O 0.05-0.15％，溫度28-30℃，攪拌轉速250-350rpm，通氣量1.5-3.0m3/h培養18-36小時，得到種子液；

(3)將種子液8-15％(V/V)接種至含有發酵培養基的100L發酵罐中(70L/100L)，發酵培養基組成成分為：淀粉液化液4.0％-12.0％，初始氮源2.5-4.0％，豆油0.08-0.16％，MgSO₄.7H₂O 0.08-0.16％，(NH4)2SO40.02-0.05％,KH₂PO₄ 0.15-0.40％，ZnSO₄ 0.005-0.01％，MnSO₄0.005-0.01％。

3.如權利要求1所述的種赤霉素GA4的發酵工藝，其特征在于，在發酵前期，培養溫度28-30℃，通氣量7-8m3/h，攪拌轉速350-450rpm，培養時間24-48小時；在發酵后期，培養溫度31-33℃，通氣量5-6m3/h，攪拌轉速200-350rpm，培養時間120-144小時。

4.如權利要求1所述的一種赤霉素GA4的發酵工藝，其特征在于，發酵過程補入的糖為飴糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、糊精、淀粉液化液的一種或幾種組合。

5.如權利要求2所述的一種赤霉素GA4的發酵工藝，其特征在于，所述發酵培養基中的初始氮源為黃豆餅粉、花生餅粉、玉米蛋白粉、大米蛋白粉、脫酚棉籽蛋白、(NH4)2SO4，NaNO3的一種或者幾種組合。

6.如權利要求1所述的一種赤霉素GA4的發酵工藝，其特征在于，發酵過程補入的氮源可以是花生粉、黃豆粉、硫酸銨、氨水、醋酸銨的一種或幾種組合。