[發明專利]一種甘藍型油菜低溫雄性不育位點的分子標記及其引物對和應用

在審

• 申請號: 202211296261.3
• 申請日: 2022-10-21
• 公開（公告）號: CN116622874A
• 公開（公告）日: 2023-08-22
• 發明（設計）人: 管榮展;楊茂;曹麗芳;陳俊;江小美
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/04
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 孫斌

1.一種甘藍型油菜低溫雄性不育位點的分子標記，其特征在于，所述分子標記包括BnInDel12、BnInDel18、BnInDel20和BnInDel23中的任意一種或者多種，其序列分別如SEQID?NO.1-4所示。

2.一種用于擴增和檢測權利要求1所述的甘藍型油菜低溫雄性不育位點的分子標記的引物對，其特征在于，所述引物對優選包括Seq?InDel12-F和Seq?InDel12-R、Seq?InDel18-F和Seq?InDel18-R、Seq?InDel20-F和Seq?InDel20-R、Seq?InDel23-F和Seq?InDel23-R中任意一對或者多對，其中：

Seq?InDel12-F的序列如SEQ?ID?NO.5所示；

Seq?InDel12-R的序列如SEQ?ID?NO.6所示；

Seq?InDel18-F的序列如SEQ?ID?NO.7所示；

Seq?InDel18-R的序列如SEQ?ID?NO.8所示；

Seq?InDel20-F的序列如SEQ?ID?NO.9所示；

Seq?InDel20-R的序列如SEQ?ID?NO.10所示；

Seq?InDel23-F的序列如SEQ?ID?NO.11所示；

Seq?InDel23-R的序列如SEQ?ID?NO.12所示。

3.一種控制甘藍型油菜低溫雄性不育位點，其特征在于，所述控制甘藍型油菜低溫雄性不育位點為Bnlst1，由權利要求1所述的述分子標記BnInDel12、BnInDel18、BnInDel20和BnInDel23與油菜低溫雄性不育位點緊密連鎖的分子標記BnInDel06和BnInDel24，將所述控制甘藍型油菜低溫雄性不育位點Bnlst1，定位于甘藍型油菜A07染色體上Bna?A07_27452837bp-28262531bp，位于分子標記BnInDel06和BnInDel24之間的809.41kb區間內；所述分子標記BnInDel06和BnInDel24的序列分別如SEQ?ID?NO.13和16所示。

4.一種權利要求1所述的甘藍型油菜低溫雄性不育位點的分子標記的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)甘藍型油菜低溫雄性不育位點的獲得：利用低溫雄性不育材料7613S與其姊妹系進行雜交，得到雜種F₁，F₁與低溫雄性不育材料7613S進行回交，得到BC₁群體，選擇BC₁群體中的若干株低溫雄性不育單株和若干株低溫可育單株，進行BSA測序分析，低溫雄性不育位點被定位在A07：27432829bp-29445255bp區間內，共包含8496個SNPs和2459個InDels；

(2)甘藍型油菜矮桿位點緊密分子標記的獲得：

利用BSA混合分組分析法將低溫雄性不育位點定位在油菜A07染色體上的A07：27432829bp-29445255bp區間內，下載油菜參考基因組序列，在InDel位點的上下游各增加150bp設計引物，采用Primer?Premier?5.0軟件在BnaA07：27432829bp-29445255bp區域內設計多個分子標記；

提取BC₁群體油菜材料葉片的基因組DNA，PCR擴增反應，在設計的多個分子標記中，BnInDel12、BnInDel18、BnInDel20和BnInDel23分子標記與低溫雄性不育性狀共分離，利用上述的4個共分離分子標記與油菜低溫雄性不育位點緊密連鎖的分子標記BnInDel06和BnInDel24，將所述控制甘藍型油菜低溫雄性不育位點命名為Bnlst1，定位于甘藍型油菜A07染色體上Bna?A07_27452837bp-28262531bp，位于分子標記BnInDel06和BnInDel24之間的809.41kb區間內。