[發(fā)明專利]一種通過胚搶救技術(shù)獲得櫻花遠緣雜交后代的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211296010.5
• 申請日: 2022-10-21
• 公開（公告）號: CN115462312B
• 公開（公告）日: 2023-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱逸民;禹霖;陳旭陽;吳思政;柏文富;李建揮;聶東伶;熊穎
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南省植物園
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H4/00;A01G24/28;A01G24/15
• 代理公司: 北京弘權(quán)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11363
• 代理人: 逯長明;朱紫曉

1.一種通過胚搶救技術(shù)獲得櫻花遠緣雜交后代的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)花粉獲取：在父本樹上選取花藥未散花粉的櫻花，用鑷子取下花藥置于墊有硫酸紙袋的培養(yǎng)皿中，干燥使雄蕊開裂散出花粉，隨后將散出的花粉連同花藥裝入5ml離心管中，4℃冷藏備用或-80℃冷凍保存；

2)去雄方法：授粉前1天選取未開放的大蕾期櫻花進行人工去雄，去雄后用硫酸紙袋進行套袋；

3)雜交方法：將冷藏或冷凍的花粉恢復(fù)至常溫，使用小筆刷蘸取花粉，對已經(jīng)提前去雄的雌蕊進行授粉，蘸取一次可授3-4朵花，然后進行授粉后處理；

4)獲取雜交胚：母本花朵授粉25-30天后，采集幼果，對幼果清洗消毒，轉(zhuǎn)移至托盤中備用；用雜交胚剝離方法獲得干凈的雜交胚；

5)雜交胚培養(yǎng)獲得雜交苗：將雜交胚接種至胚搶救培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，接種方式為胚尖朝下，淺插在培養(yǎng)基上，接種后培養(yǎng)30-35天之后將誘導(dǎo)出的苗轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中進行壯苗培養(yǎng)，30天后將壯苗轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，25-30天后獲得雜交苗；所述胚搶救培養(yǎng)基：MS+6-BA1.0mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.2mg/L；所述壯苗培養(yǎng)基：MS+6-BA0.5mg/L+GA3?0.5mg/L+NAA0.2mg/L；所述生根培養(yǎng)基：WPM+IBA1.0mg/L+NAA1.0mg/L；

6)煉苗移栽馴化：生根培養(yǎng)25-30天后，選擇4-5片葉，3-4條根的幼苗，將組培瓶打開進行煉苗，使雜交苗生長環(huán)境溫度、濕度與外界環(huán)境一致，7-14天后，清洗掉雜交苗根部殘留的培養(yǎng)基，移栽種植，種植后澆透水，轉(zhuǎn)移至小拱棚中保濕，7-15天后打開小拱棚進行正常管理。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種通過胚搶救技術(shù)獲得櫻花遠緣雜交后代的方法，其特征在于：步驟1)中，花粉干燥方式：自然散光干燥12-24小時，然后放入干燥皿中干燥8小時。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種通過胚搶救技術(shù)獲得櫻花遠緣雜交后代的方法，其特征在于：步驟3)中，授粉后處理：授粉后用硫酸紙袋進行套袋處理，5-7天后去除紙袋，改用尼龍網(wǎng)袋套袋。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種通過胚搶救技術(shù)獲得櫻花遠緣雜交后代的方法，其特征在于：步驟4)中，對幼果清洗消毒方法：自來水清洗干凈，轉(zhuǎn)移至超凈工作臺，75％酒精消毒30s-1min，無菌水清洗2-3遍，10％次氯酸鈉溶液浸泡消毒8分鐘或0.1％HgCl₂溶液浸泡消毒5分鐘，無菌水清洗4-5遍。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種通過胚搶救技術(shù)獲得櫻花遠緣雜交后代的方法，其特征在于：步驟4)中，雜交胚剝離方法：用手術(shù)鉗以垂直于果實腹縫線的角度輕輕夾開幼果，用鑷子順夾縫打開種殼，取出種子，再用鑷子剝?nèi)シN皮，獲得干凈的雜交胚，剝皮過程不能傷及胚尖部位。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種通過胚搶救技術(shù)獲得櫻花遠緣雜交后代的方法，其特征在于：步驟5)中，胚搶救培養(yǎng)基中的培養(yǎng)方式為：接種后在溫度為25℃-28℃、濕度為70％-80％的無光條件下培養(yǎng)5-7天，隨后轉(zhuǎn)移至有光條件下繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)30-35天之后進行壯苗培養(yǎng)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種通過胚搶救技術(shù)獲得櫻花遠緣雜交后代的方法，其特征在于：

步驟6)中，移栽種植選擇裝有泥炭：珍珠巖＝1:1基質(zhì)的50孔林木高腳穴盤中種植。