[發(fā)明專利]煙草及煙草制品中煙堿鹽含量的測定方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202211294044.0
• 申請日: 2022-10-21
• 公開（公告）號: CN115541789A
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發(fā)明（設計）人: 田雨閃;陳歡;韓書磊;蘇悅;劉彤;付亞寧;王紅娟;侯宏衛(wèi);胡清源
• 申請（專利權(quán)）人: 國家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京瑞恒信達知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11382
• 代理人: 侯淑紅

1.一種煙草及煙草制品中煙堿鹽含量的測定方法，該方法包括如下步驟：

(1)稱取煙草于離心管中，加入內(nèi)標溶液和水性溶液，靜置，備用；

(2)在步驟(1)得到的煙草溶液中加入甲醇，超聲萃取，備用；

(3)將步驟(2)得到的萃取液進行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)分析；

(4)采用內(nèi)標標準曲線法定量計算樣品中目標物的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述內(nèi)標溶液為苯甲酸-d5和煙堿-d3的甲醇溶液，濃度為500μg/mL和400μg/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步驟(1)中，所述水性溶液為純水、甲酸水溶液、乙酸水溶液，優(yōu)選為乙酸水溶液；

優(yōu)選地，在步驟(1)中，當水性溶液為甲酸水溶液或乙酸水溶液時，溶液的濃度為0.2～1％(體積比)，優(yōu)選為0.2％(體積比)；

優(yōu)選地，在步驟(1)中，當水性溶液為純水時，體積為5～15mL，優(yōu)選為5mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，在步驟(2)中，所述甲醇的體積為10～20mL，優(yōu)選為20mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析使用的色譜柱選自Phenomenex Kinetex HILIC(4.6×150mm，2.6μm)、Phenomenex Luna C18(2)(4.6×150mm，3μm)、Waters Xbridge BEH Amide(2.1×100mm，2.5μm)和Thermo SCIENTIFIC Acclaim Trinity P1(3×100mm，3μm)色譜柱，優(yōu)選為WatersXbridge BEH Amide(2.1×100mm，2.5μm)色譜柱；

優(yōu)選地，所述液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析使用的流動相選自5mmol/L乙酸銨水溶液和含濃度為5mmol/L乙酸銨的乙腈/水(V:V＝95/5)溶液、5mmol/L乙酸銨溶液(pH 9.0)和含濃度為5mmol/L乙酸銨的乙腈/水(V:V＝95/5，pH 9.0)溶液，優(yōu)選為5mmol/L乙酸銨水溶液(pH9.0)和含濃度為5mmol/L乙酸銨的乙腈/水(V:V＝95/5，pH 9.0)溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析的色譜條件還包括：柱溫為40℃；梯度洗脫程序為：初始流速0.6mL/min，0.5min時流速降至0.4mL/min，7.2min時流速升至0.6mL/min，保持1.8min，運行總時間為9min；進樣體積為1μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項所述的方法，其特征在于，在步驟(3)中，所述液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析的質(zhì)譜條件包括：離子源：電噴霧離子源；離子化方式：ESI(+)；檢測模式：MRM模式；錐孔溫度(Cone Temperature)：130℃；電噴霧電壓(Spray Voltage)：4000V(+)，3500V(-)；錐孔氣流速(Cone Gas Flow)：20psi；加熱探針溫度(Heated ProbeTemperature)：350℃；探針氣流速(Probe Gas Flow)：50psi；霧化器氣流速(NebulizerGas Flow)：55psi；

優(yōu)選地，在步驟(3)中，目標化合物和內(nèi)標的MRM質(zhì)譜檢測參數(shù)如下：