[發(fā)明專利]一種高效快速鑒定柑橘多胚品種有性胚的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211292040.9
• 申請日: 2022-10-21
• 公開（公告）號: CN115720848B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 解凱東;謝善鵬;張藝;陳昊;伍小萌;郭文武
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H1/04
• 分類號: A01H1/04
• 代理公司: 湖北中禮和律師事務(wù)所 42297
• 代理人: 溫珊姍

本發(fā)明公開了一種高效快速鑒定柑橘多胚品種有性胚的方法，屬于柑橘生物育種技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的方法包括如下步驟：1)成熟種子準(zhǔn)備：從柑橘多胚品種成熟果實中剝?nèi)〕龇N子，并剝?nèi)コN子的內(nèi)外種皮；2)有性胚的鑒定：觀察種胚顏色，若既有白色又有綠色，則統(tǒng)計每粒種子白胚和綠胚數(shù)量。若白胚僅1個、綠胚有多個(1白+多綠)，則白胚為有性胚；反之，若綠胚僅1個、白胚有多個(1綠+多白)，則綠胚為有性胚。本發(fā)明依據(jù)種胚顏色鑒定柑橘多胚品種的有性胚，方法簡便易操作，準(zhǔn)確率高，節(jié)約了時間和勞力的投入，可提高以多胚柑橘品種為母本有性雜交的育種效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于柑橘生物育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從柑橘多胚品種種子高效快速鑒定有性胚的方法。

背景技術(shù)

柑橘起源于我國，是我國南方最重要的經(jīng)濟(jì)果樹。柑橘資源豐富，但除了柚、宜昌橙、枸櫞和少數(shù)寬皮橘等可產(chǎn)生單胚種子外，柑橘大多數(shù)品種均具有多胚性。柑橘多胚性是指一個種子含有2個以上的胚(少的2-3個/種子，多者可達(dá)30-40個/種子)，但通常只有一個為有性胚，其余為由珠心細(xì)胞發(fā)育而來的珠心胚。珠心胚由母本體細(xì)胞發(fā)育形成，萌發(fā)后形成的植株性狀與母本完全一致，屬于無性胚。珠心胚在發(fā)育過程中會與有性胚競爭營養(yǎng)和空間，且由于珠心胚在競爭上占有優(yōu)勢，容易導(dǎo)致有性胚早夭，使得以柑橘多胚品種為母本的雜交育種難以獲得雜種后代，育種效率低。為克服上述雜交障礙，育種家一般偏向選擇以單胚柑橘品種為母本雜交育種；但柑橘單胚品種數(shù)量非常有限，且僅以單胚品種為母本雜交容易使后代背景愈發(fā)狹窄和結(jié)構(gòu)單一，難以培育出有突破性性狀的優(yōu)良新品種。因此，以多胚品種為親本開展雜交育種是打破柑橘品種背景狹窄等瓶頸的有效途徑，前提是具備在早期階段(種子發(fā)育成熟階段)能有效鑒定并分離有性后代的便捷方法。但目前關(guān)于從多胚品種的種子中分離有性胚的方法很少，現(xiàn)有技術(shù)主要是在幼苗階段，通過觀察比較實生苗之間的形態(tài)差異，或通過分子標(biāo)記技術(shù)篩選有性后代。但無論哪種方法，均需先實生播種，獲得植株后才能對有性后代進(jìn)行篩選，普遍存在耗時長、工作量大和效率低的缺點，難以大規(guī)模應(yīng)用。因此，建立種子階段就能夠快速鑒定有性胚的技術(shù)，不僅可以減少大量實生播種和分子標(biāo)記等過程的繁重工作量，而且能節(jié)約從種子播種和幼苗生長的時間，極大地提高了柑橘雜交育種效率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對目前在柑橘多胚品種中缺乏高效快速鑒定有性胚的方法和現(xiàn)有技術(shù)鑒定柑橘有性后代存在耗時間長、工作量大和效率低的問題，提供一種能在種子階段即可快速準(zhǔn)確鑒定柑橘多胚品種有性胚的方法：即依據(jù)種胚顏色判斷其是有性胚或珠心胚。該方法簡便易操作，無需進(jìn)行實生播種和分子標(biāo)記鑒定，即可鑒定和分離有性胚，不僅操作簡便、準(zhǔn)確率高，而且可減少實生播種和分子標(biāo)記鑒定的工作量和時間投入，大大提高了以多胚柑橘為母本的有性雜交育種效率。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種高效快速鑒定柑橘多胚品種有性胚的方法，根據(jù)多胚性柑橘品種成熟果實種子的種胚顏色鑒定，若多胚種子同時含有白胚和綠胚，白胚僅1個、綠胚有多個時白胚為有性胚，綠胚僅1個、白胚有多個時綠胚為有性胚。

進(jìn)一步地，所述的高效快速鑒定柑橘多胚品種有性胚的方法，包括如下步驟：

(1)材料準(zhǔn)備。采集多胚性柑橘品種的成熟果實并剝出種子，去種皮后，觀察種胚顏色；若某品種的多胚種子同時含有綠胚和白胚，則可通過下面的方法鑒定和分離有性胚。

(2)有性胚的鑒定。將含有白胚和綠胚的種子挑出，統(tǒng)計每粒種子的白胚和綠胚數(shù)量。若白胚僅1個、綠胚有多個(1白+多綠)，則白胚為有性胚；反之，若綠胚僅1個、白胚有多個(1綠+多白)，則綠胚為有性胚。

步驟(1)中，去除種皮的方法優(yōu)選為：將種子用1mol/L?NaOH溶液浸泡15min，并用清水洗凈，再用鑷子將種子的內(nèi)、外種皮剝除干凈。

步驟(2)中，在解剖顯微鏡下用鑷子將種子的白胚和綠胚分離。