[發明專利]一株降解黃曲霉毒素菌株的篩選方法

在審

• 申請號: 202211291053.4
• 申請日: 2022-10-21
• 公開（公告）號: CN115975859A
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 馬杰;譚碧娥;周苗;尹杰;黃珂
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12Q1/04;C12Q1/689;C12R1/01
• 代理公司: 北京和聯順知識產權代理有限公司 11621
• 代理人: 孫偉新

本發明公開了一株降解黃曲霉毒素菌株的篩選方法，包括以下步驟：步驟1：培養基的制備；步驟2：從環境中取腐殖土、枯葉和枯木等樣品加生理鹽水稀釋并搖勻，于種子培養基中培養；步驟3：吸取菌液于初篩培養基上，待長出菌落后接種于種子培養基中培養，觀察渾濁情況；步驟4：將菌液涂板于初篩培養基上，再將上述步驟3和4重復3次，保存能以香豆素為碳源生長的菌株進行復篩選；步驟5：將初篩菌株在發酵培養基中培養，測定黃曲霉毒素降解率；步驟6：選擇降解率最高菌株16S?rDNA測序進行菌種鑒定。本發明提供了可快速篩選降解黃曲霉毒素菌株的方法，且提供了降解黃曲霉毒素的菌株為乳酸乳球菌，可以有效的對黃曲霉毒素進行降解，且降解率較高。

技術領域

本發明涉及微生物應用技術領域，尤其涉及一株降解黃曲霉毒素菌株的篩選方法。

背景技術

隨著我國經濟的不斷發展，畜牧業是除農作物外的第二大農業產業，在農業經濟中發揮著越來越突出的作用。飼料作為畜牧業養殖中非常重要的一環，近年來，飼料原料的污染給養殖業帶來巨大損失，其中黃曲霉毒素污染占據較高的比例。黃曲霉毒素是黃曲霉等真菌產生的具有強毒、致癌的次級代謝產物，導致動物機體DNA突變，還可抑制DNA和RNA的合成，從而抑制蛋白質的合成，對肝臟具有很強毒性，從而降低動物生產性能，造成巨大經濟損失，甚至黃曲霉毒素污染的產品進而危害人類健康。然而目前化學和物理方法處理黃曲霉毒素去除率低，且難以排除化學殘留問題，而微生物技術處理具有高效，無毒，綠色等特點，因此我們我們選擇微生物降解的新型方法解決和改善這一問題。

通過上述分析，現有技術存在的問題及缺陷為：目前微生物降解黃曲霉毒素的研究報道較少，并且篩選降解黃曲霉毒素菌株的方法未統一且菌株對黃曲霉毒素的降解率較低。

發明內容

1.要解決的技術問題

本發明的目的是為了解決現有技術中微生物降解黃曲霉毒素的研究報道較少，并且篩選降解黃曲霉毒素菌株的方法未統一且菌株對黃曲霉毒素的降解率較低的問題，而提出的一株降解黃曲霉毒素菌株的篩選方法。

2.技術方案

為了實現上述目的，本發明采用了如下技術方案：

一株降解黃曲霉毒素菌株，所述黃曲霉毒素降解菌為乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)，已于2022年08月29日保藏于中國典型培養物保藏中心(武漢)，保藏號為：CCTCCNO:M?20221340。

本發明中還提出了一株降解黃曲霉毒素菌株的篩選方法，包括以下步驟：

步驟1：培養基的制備，包括種子培養基、初篩培養基和發酵培養基的制備；

步驟2：從環境中取腐殖土、枯葉和枯木等樣品加生理鹽水稀釋并搖勻，靜止5分鐘后吸取上清液于種子培養基中，在37℃下，恒溫箱中培養72小時，觀察渾濁情況；

步驟3：吸取菌液于初篩培養基上，在37℃下，恒溫箱中培養1周，待長出菌落后接種于種子培養基中，在37℃下，恒溫箱中培養72小時，觀察渾濁情況；

步驟4：將菌液涂板于初篩培養基上，再將上述步驟3和4重復3次，保存能以香豆素為碳源生長的菌株進行復篩選；

步驟5：將初篩菌株在發酵培養基中37℃培養72小時，測定黃曲霉毒素降解率；

步驟6：選擇降解率最高菌株16S?rDNA測序進行菌種鑒定。

優選地，所述步驟1中種子培養基為營養肉湯(pH7.0)。