[發明專利]一種培養基及生產抗CGRPR抗體的方法

在審

• 申請號: 202211282914.2
• 申請日: 2022-10-19
• 公開（公告）號: CN115819589A
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 田呂明;趙杰;孫世騰;胡伶俐;曹旺;劉曄;龍伊迪;張帆;袁宏麗
• 申請（專利權）人: 武漢人福創新藥物研發中心有限公司;武漢光谷人福生物醫藥有限公司;湖北生物醫藥產業技術研究院有限公司;人福醫藥集團股份公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12P21/08;C12N5/10
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 黃益澍

本發明公開了一種培養基及利用其生產抗CGRPR抗體的方法，所述方法在發酵培養基中培養可表達所述抗CGRPR抗體的細胞，在所述發酵培養基中添加組氨酸和含半乳糖的糖型調節劑，并在發酵過程中通過補料加入含甘露糖的補料培養基。本發明方法可有效控制抗體電荷異質性和優化抗體糖型，通過控制細胞工藝流程有效降低抗體的酸性峰，提高抗體的堿性峰，同時優化高甘露糖和G0F等糖型。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體地涉及一種培養基及利用其生產抗CGRPR抗體的方法。

背景技術

由于單克隆抗體復雜的分子結構和較大的分子量，其在生產和儲存過程中可產生大量的修飾，使得抗體產生多種異構體，這些異構體的組合導致了單克隆抗體的電荷異質性、糖基化修飾異質性等。糖基化水平和糖基化修飾類型是單抗藥物的重要參數，而目前改變抗體糖基化方法主要在基因水平來改變抗體糖型或糖基化水平，這種方法耗費時間且安全性和穩定性缺乏保障。電荷異質性是單抗生產工藝中重要的質量屬性，電荷異質性會產生酸堿峰，尤其是酸峰嚴重影響單抗的穩定性及生物學功能，進而影響其組織滲透性和藥代動力學。而通過控制細胞工藝流程來控制抗體電荷異質性和優化抗體糖型具有很大的挑戰性。

降鈣素基因相關肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP)是一種在偏頭痛發生過程中起重要作用的神經遞質。可通過阻斷CGRP或其受體治療和預防偏頭痛發作，因此CGRP也是目前治療偏頭痛的熱門靶點，由此開發出治療用的小分子CGRP受體拮抗劑和預防用的CGRP單克隆抗體。其中厄瑞努單抗(Erenumab)是一種針對和阻斷典型CGRP受體的有效單克隆抗體。多項臨床試驗證明了Erenumab對發作性偏頭痛(EM)和慢性偏頭痛(CM)的預防效果和良好耐受性。

然而尚未有技術方案提供優化制備厄瑞努單抗的方法。

發明內容

為解決現有技術中缺乏優化制備抗CGRPR抗體的有效方法的問題，本發明提供一種培養基及利用其生產抗CGRPR抗體的方法。本發明的方法通過控制細胞工藝流程調節抗體的電荷異質性并優化抗體的糖型，生產出與原研藥物質量類似的厄瑞奴單抗ERENUMAB。

為了實現上述目的：

本發明第一方面提供一種生產抗CGRPR抗體的方法，所述方法在發酵培養基中培養可表達所述抗CGRPR抗體的細胞，在所述發酵培養基中添加組氨酸和含半乳糖的糖型調節劑，并在發酵過程中通過補料加入含甘露糖的補料培養基。

本發明一些實施方案中，所述方法包括以下一種或多種條件：

(1)所述抗CGRPR抗體為厄瑞奴單抗；

(2)所述組氨酸的濃度為2g/L；

(3)所述甘露糖的濃度為50g/L；

(4)所述糖型調節劑的濃度為2％；和/或，所述糖型調節劑還包括錳離子和/或尿苷；其中％為體積百分比；

(5)所述方法中總葡萄糖不足3g/L時補到4～6g/L。

本發明一些實施方案中，所述細胞為CHO細胞，優選所述CHO細胞選自CHO-K1、CHODG44和CHO-S細胞，更優選為CHO-K1細胞。

本發明一些實施方案中，所述發酵培養基選自OPM-CHO CD063 DPM(奧浦邁)、OPMCD07 DPM(奧浦邁)、Dynamis(Gibco)、actipro(Hyclone)和CHO MaxD(邁邦)中的一種或多種。