[發明專利]一種產卵孢素球孢白僵菌菌株及其在CZB中合成卵孢素的應用

在審

• 申請號: 202211279697.1
• 申請日: 2022-10-19
• 公開（公告）號: CN116121083A
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發明（設計）人: 范艷華;劉宇;石祥;陳泓均;金丹
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N1/15
• 分類號: C12N1/15;C12N15/31;C12N15/56;C12N15/80;C12N15/65;C12P7/66;C12R1/645
• 代理公司: 重慶博凱知識產權代理有限公司 50212
• 代理人: 張先蕓

1.一種產卵孢素球孢白僵菌菌株，其特征在于，為ΔBbbgli1-ops3^OE菌株，該菌株由超表達ops3基因后，再敲除Bbbgli1基因得到的。

2.根據權利要求1所述產卵孢素球孢白僵菌菌株，其特征在于，所述ΔBbbgli1-ops3^OE菌株采用如下方法獲得：

1）以球孢白僵菌基因組作模板擴增得到ops3基因，并將其克隆進pk2-bar載體的組成型啟動子PgpdA下，得pk2-bar-ops3；

2）將pk2-bar-ops3轉入根癌農桿菌LBA4404后，利用根癌農桿菌介導球孢白僵菌的遺傳轉化，并經PCR篩選獲得超量表達ops3的ops3^OE菌株；

3）以球孢白僵菌基因組作模板擴增得到Bbbgli1基因的左臂Bbbgli1L和右臂Bbbgli1R，分別構建進pk2-sur載體，得敲除載體pk2-sur-?Bbbgli1L-bar-?Bbbgli1R；

4）將pk2-sur-?Bbbgli1L-bar-?Bbbgli1R轉入根癌農桿菌LBA4404后，利用根癌農桿菌介導法將pk2-sur-?Bbbgli1L-bar-?Bbbgli1R轉入ops3^OE菌株，并經PCR篩選獲得DBbbgli1-ops3^OE菌株。

3.如權利要求1或2所述產卵孢素球孢白僵菌菌株在CZB中合成卵孢素的應用，其特征在于，用于在CZB培養基中大量合成卵孢素。

4.一種采用權利要求1或2所述產卵孢素球孢白僵菌菌株在CZB中合成卵孢素的方法，其特征在于，具體步驟包括：

1）將ΔBbbgli1-ops3^OE表達菌株接種到CZB培養基中于26?℃搖床上培養5?d；

2）離心后將上清液用等體積的乙酸乙酯進行萃取，過夜；

3）收集乙酸乙酯相和水相，分別經旋轉蒸發儀蒸干后，用100%甲醇溶解后離心，得到的上清液即為卵孢素。