[發(fā)明專利]一種利用碳酸氫鹽強化微藻固碳路徑提高積脂效率的方法

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• 申請日: 2022-10-19
• 公開（公告）號: CN115558627A
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李玉芹;任站;賈權(quán)威;陳賽蘭;羅媛媛
• 申請（專利權(quán)）人: 湘潭大學(xué)
• 主分類號: C12N1/36
• 分類號: C12N1/36;C12N1/38;C12P7/6463;C12R1/89
• 代理公司: 湘潭市匯智專利事務(wù)所(普通合伙) 43108
• 代理人: 冷玉萍

1.一種利用碳酸氫鹽強化微藻固碳路徑提高積脂效率的方法，其特征在于，包括如下步驟：(1)以10-50mmol/L的低濃度碳酸氫鹽馴化培養(yǎng)微藻株獲得低濃度碳酸氫鹽適應(yīng)性種子液；(2)將步驟(1)所得馴化微藻種子液接入以100-200mmol/L的中濃度碳酸氫鹽為唯一碳源的培養(yǎng)體系調(diào)控強化微藻C4固碳路徑，提升胞內(nèi)脂質(zhì)含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用碳酸氫鹽強化微藻固碳路徑提高積脂效率的方法，其特征在于，所述的碳酸氫鹽為碳酸氫鈉或碳酸氫鉀。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用碳酸氫鹽強化微藻固碳路徑提高積脂效率的方法，其特征在于，所述的微藻株為具備C4固碳路徑的藻種屬。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用碳酸氫鹽強化微藻固碳路徑提高積脂效率的方法，其特征在于，所述的微藻株為三角褐指藻Phaeodactylum Tricornutum。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用碳酸氫鹽強化微藻固碳路徑提高積脂效率的方法，其特征在于，所述的低濃度碳酸氫鹽馴化培養(yǎng)微藻株具體為：以常規(guī)無菌操作平板劃線法活化微藻株，挑取單克隆微藻，于含有10-50mmol/L的低濃度碳酸氫鹽的f/2培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)天，后轉(zhuǎn)入新鮮f/2培養(yǎng)基中并隔天滴加低濃度碳酸氫鹽培養(yǎng)數(shù)天，獲得低濃度碳酸氫鹽適應(yīng)性微藻株種子液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用碳酸氫鹽強化微藻固碳路徑提高積脂效率的方法，其特征在于，所述的以100-200mmol/L的中濃度碳酸氫鹽為唯一碳源調(diào)控強化微藻C4固碳路徑具體為：將低濃度碳酸氫鹽馴化的微藻株種子液接入以中濃度碳酸氫鹽為唯一碳源的f/2培養(yǎng)體系中誘導(dǎo)數(shù)天。

7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項所述的利用碳酸氫鹽強化微藻固碳路徑提高積脂效率的方法，其特征在于，還包括步驟(3)，解析微藻C4固碳路徑調(diào)控酶酶活與胞內(nèi)脂質(zhì)含量相關(guān)性，確定強化C4固碳路徑對積脂效率的提高作用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用碳酸氫鹽強化微藻固碳路徑提高積脂效率的方法，其特征在于，所述的步驟(3)具體為：收集中濃度碳酸氫鹽誘導(dǎo)藻株細(xì)胞，經(jīng)離心、洗滌、超聲破壁后，以比色定量試劑盒法測定上清液C4固碳路徑調(diào)控酶酶活；離心收集中濃度碳酸氫鹽誘導(dǎo)藻細(xì)胞，經(jīng)凍干、有機試劑抽提、真空干燥獲得胞內(nèi)總脂重量，以細(xì)胞干重法計算得胞內(nèi)總脂含量；將C4固碳路徑調(diào)控酶酶活與胞內(nèi)脂質(zhì)含量數(shù)據(jù)分別輸入IBM SPSSStatistics 26.0或Origin 9.0或Excel軟件進(jìn)行相關(guān)性分析，確定微藻株C4固碳路徑強化對提高脂質(zhì)合成積累效率的作用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的利用碳酸氫鹽強化微藻固碳路徑提高積脂效率的方法，其特征在于，所述的C4固碳路徑調(diào)控酶包括碳酸酐酶、核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸磷酸二激酶、NAD-蘋果酸脫氫酶和NAD-蘋果酸酶。