[發明專利]一種促進天麻種子萌發的真菌YLW10及其應用

在審

• 申請號: 202211268862.3
• 申請日: 2022-10-17
• 公開（公告）號: CN116064245A
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 張漢波;靳曉寒;何海艷;王玉川;李玉;李東
• 申請（專利權）人: 云南大學;昭通學院;昭通市天麻研究院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;A01C1/06;C12R1/645
• 代理公司: 昆明盛鼎宏圖知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 53203
• 代理人: 王輝

本發明是一種促進天麻種子萌發的菌株YLW10及其應用，該菌株的分類命名為Mycena?abramsii，保藏登記號為：CGMCC?No.40281，將YLW10菌株制成天麻種子萌發菌菌包可用于天麻種植。由于YLW10菌株是從昭通野生環境下捕獲的原球莖樣本中分離得到，保證了野生昭通天麻的品質特性且能夠確保適應昭通當地。在與昭通當地種植所用菌株黃緣小菇的對比實驗驗證了本發明YLW10菌株的高萌發率的優良品質，能有效增加天麻的產量，提高經濟效益，可推進萌發菌菌種資源開發，并擴展昭通地區天麻種子萌發菌種資源庫，實現昭通天麻的科學規范化、規模化種植。

技術領域

本發明涉及一種促進天麻種子萌發的真菌YLW10及其應用，屬于微生物技術領域。

背景技術

天麻(Gastrodia?elata)是一種高度特化的蘭科植物，無綠葉，不產生葉綠素，終身不進行光合作用，完全依賴真菌營養。天麻的每個蒴果雖然能產生幾萬粒種子，但種子如粉塵般微小，無胚乳和其他營養貯備部位，必須依靠真菌侵染胚細胞后提供營養才能萌發。目前，天麻一般認為與小菇屬(Mycena?sp.)?的真菌共生萌發，發育為原球莖后的營養生長需要轉換到與另一個特異的真菌蜜環菌(Armillaria?mellea)共生完成整個生活史。

天麻萌發菌分離較為不易，較有效的分離來源為原球莖，收集林下樹葉用成熟天麻種子誘捕其上的萌發菌，待種子萌發后，用得到的原球莖分離真菌。自1980年分離得到天麻種子萌發菌并應用于天麻有性繁殖以來，萌發菌的分離鑒定一直是研究熱點，但由于其為弱腐生菌，其生長慢、難培養的特點使分離鑒定困難較大，分離鑒定得到的菌株不多。用于生產的萌發菌主要是石斛小菇?(Mycena?dendrobii)和紫萁小菇(Mycena?osmundicola)2種，但在長期的無性繁殖過程中，菌種退化現象十分嚴重，萌發菌種質資源嚴重缺乏。并且不同地域分離得到的萌發菌對天麻種子的萌發率和萌發質量也各不相同。因此，迫切需要分離篩選出適合昭通當地的一種優質萌發菌，以保證昭通天麻的產量和質量。

發明內容

本發明提供一種促進天麻種子萌發的真菌YLW10，以及它的分離篩選方法和應用。

本發明所述的真菌為溝紋小菇(Mycena?abramsii)YLW10，保藏登記號為：?CGMCCNo.40281；保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏地點：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏日期：2022年08月15日。

本發明萌發菌是在野生環境下利用天麻種子袋人工捕獲的原球莖中分離到的。

本發明所述真菌的應用為促進天麻種子萌發。即在與天麻種子拌播的萌發中，該菌株萌發率極高，有效地保證昭通天麻的產量和質量。

本發明所述真菌的獲取方法包括以下步驟：

1)野外人工捕獲原球莖：選擇天麻種子自然成熟的7月，在昭通天麻主要產區彝良縣小草壩選取有野生天麻分布，沒有人工種植的原生地。就地取當地的枯枝落葉和土壤拌天麻種子并裝進大小為45cm(長)×30cm(寬)的網格種子袋。3個月后收回種子袋，篩分出種子袋中的天麻組織樣品，種子袋中的天麻組織皆為原球莖階段。表面消毒后放入4℃冰箱保存。

2)天麻種子萌發菌分離培養：先用0.5％的次氯酸鈉浸泡30s，再用75％的乙醇浸泡30s，后用無菌水沖洗3次，然后用無菌濾紙沾干。接著用無菌解剖刀切成大概0.02mm的小塊，再用無菌的鑷子將小塊按三點法分別接種在提前設計好的不同種的分菌培養基上，置于28℃恒溫培養箱。長出的白色菌落按三點法接于PDA培養基上，直到板上長出純菌。

3)分子鑒定：將長出純菌落的真菌進行ITS序列的分子鑒定。采用CTAB?方法提取真菌菌絲的全基因組DNA，然后對DNA的ITS區域進行PCR擴增。?PCR擴增產物送至上海生工生物技術有限公司測序，測序結果在NCBI上進行?BLAST比對分析，記錄真菌的分類地位。結合BLAST比對分析結果，該菌株為溝紋小菇(Mycena?abramsii)。