[發(fā)明專利]用于難破壁病原體分子診斷的參考品及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211268532.4
• 申請(qǐng)日: 2022-10-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115595379A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-01-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫曉琴;傅成波;喬陽(yáng);肖丹;閆玉敬;龔皎;曾濱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京博暉創(chuàng)新生物技術(shù)集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/689;C12N15/11;C12Q1/6851;C12N1/19;C12N15/81;C12N15/31;C12R1/01;C12R1/32;C12R1/645;C12R1/84;C12R1/865
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 張瑞雪

1.一種用于難破壁病原體分子診斷的參考品，其特征在于，所述參考品為重組酵母工程菌，且所述重組酵母工程菌的染色體上整合有外源的靶病原體基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的參考品，其特征在于，所述外源的靶病原體基因隨著所述重組酵母工程菌的染色體穩(wěn)定遺傳。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的參考品，其特征在于，所述外源的靶病原體基因在所述重組酵母工程菌中的拷貝數(shù)為單拷貝或多拷貝。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的參考品，其特征在于，所述難破壁病原體包括真菌、分枝桿菌和革蘭氏陽(yáng)性菌。

5.一種如權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的參考品的制備方法，其包括如下步驟：

S1，制備含有所述外源的靶病原體基因的線性化載體；

S2，將含有所述外源的靶病原體基因的線性化載體導(dǎo)入到酵母感受態(tài)細(xì)胞中，獲得重組酵母工程菌。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法還包括以下步驟：

S3，檢測(cè)所述重組酵母工程菌的基因組中所述外源的靶病原體基因的插入拷貝數(shù)；

S4，利用金標(biāo)準(zhǔn)確定的靶病原體臨床樣本或培養(yǎng)物的菌株與已測(cè)定所述外源的靶病原體基因的插入拷貝數(shù)的所述重組酵母工程菌進(jìn)行數(shù)量對(duì)標(biāo)，進(jìn)而對(duì)所述參考品進(jìn)行標(biāo)定。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟S3中，所述檢測(cè)的方法包括如下步驟：

T1，對(duì)所述重組酵母工程菌的基因組DNA進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)，并計(jì)算所述外源的靶病原體基因與內(nèi)參基因的起始模板拷貝數(shù)的比值；

T2，將所述比值與內(nèi)參基因的拷貝數(shù)相乘，獲得的數(shù)值即為所述重組酵母工程菌的基因組中所述外源的靶病原體基因的插入拷貝數(shù)。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述對(duì)標(biāo)為采用qPCR方法檢測(cè)一定數(shù)量所述重組酵母工程菌和作為金標(biāo)準(zhǔn)確定的一定數(shù)量的靶病原體臨床樣本或培養(yǎng)物的菌株中靶病原體基因含量的一致性。

9.一種如權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的參考品或者權(quán)利要求5-8中任意一項(xiàng)所述方法制備的參考品在制備用于檢測(cè)病原體的分子診斷產(chǎn)品中的應(yīng)用。