[發(fā)明專利]一種基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的畜禽肉源成分檢測方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211268293.2
• 申請(qǐng)日: 2022-10-17
• 公開（公告）號(hào): CN116559340A
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張巖;史國華;范素芳;李強(qiáng);何亮娜;馬俊美;王麗明
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河北省食品檢驗(yàn)研究院（國家果類及農(nóng)副加工產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心;河北省食品安全實(shí)驗(yàn)室）
• 主分類號(hào): G01N30/06
• 分類號(hào): G01N30/06;G01N30/34;G01N30/60;G01N30/72;G01N21/359;G01N21/3563
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

本發(fā)明屬于畜禽肉源成分檢測技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種基于液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜的畜禽肉源成分檢測方法，將畜禽肉用淘米水浸泡30分鐘，再用高溫殺菌處理過的水進(jìn)行清洗干凈；除脂；提取蛋白質(zhì)；還原二硫鍵；阻斷半胱氨酸和其他巰基；胰蛋白酶消化；畜禽肉源成分測定；并對(duì)畜禽肉彈性檢測及水分檢測。本發(fā)明通過查找畜禽肉特征肽段，建立了基于液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜的畜禽肉源成分檢測方法，防止源成分摻假；彈性檢測方法利用氣流和激光測距技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)畜禽肉黏彈性進(jìn)行無損傷的檢測；同時(shí)，通過對(duì)畜禽肉水分檢測能夠?qū)π笄萑獾乃趾孔隹焖俚念A(yù)測，引入多傳感器數(shù)據(jù)融合技術(shù)來對(duì)畜禽肉做全面的分析；提升檢測的準(zhǔn)確性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于畜禽肉源成分檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的畜禽肉源成分檢測方法。

背景技術(shù)

畜禽肉的種類繁多，蛋白質(zhì)含量較高，約為10％-20％，營養(yǎng)價(jià)值豐富，同時(shí)富含B族維生素、不飽和脂肪酸，是人體蛋白質(zhì)和微量元素的重要來源。畜禽肉及其制品在我國占據(jù)很大的消費(fèi)市場，2018年，我國消費(fèi)肉類7469.8萬噸，在高需求下暴露出來的是畜禽肉制品的摻假問題，引起消費(fèi)者的高度關(guān)注。因此建立肉制品源成分定性定量方法對(duì)甄別肉制品質(zhì)量、辨別肉質(zhì)真?zhèn)尉哂兄匾饬x。目前，動(dòng)物源成分檢測方法主要有酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme?linked?immunosorbent?assay,ELISA)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(polymerasechainreaction,PCR)等，其中熒光PCR方法是應(yīng)用較為廣泛的方法，也是現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)最常用的方法。ELISA方法檢測的靈敏度、準(zhǔn)確性往往受抗體性質(zhì)的影響，由于食品基質(zhì)復(fù)雜，加工過程可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性，因此該類方法易出現(xiàn)假陽性；PCR方法容易受復(fù)雜樣品基質(zhì)、DNA降解等影響，容易出現(xiàn)假陰性、假陽性等問題；因此亟需開發(fā)基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的畜禽肉源成分檢測方法。另外，現(xiàn)有檢測方法無法完全反映肉類產(chǎn)品的黏彈性特征；不能對(duì)畜禽肉是否注水進(jìn)行準(zhǔn)確檢測。

通過上述分析，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題及缺陷為：

(1)亟需開發(fā)基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的畜禽肉源成分檢測技術(shù)；

(2)現(xiàn)有檢測方法無法完全反映肉類產(chǎn)品的黏彈性特征，不能對(duì)畜禽肉是否注水進(jìn)行準(zhǔn)確檢測。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明提供了一種基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的畜禽肉源成分檢測方法。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的畜禽肉源成分檢測方法包括：

步驟一，將畜禽肉用淘米水浸泡30分鐘，再用高溫殺菌處理過的水進(jìn)行清洗干凈；

步驟二，除脂；

取1g畜禽肉到50mL離心管中，加入5mL正己烷，用旋轉(zhuǎn)攪拌機(jī)攪拌15min，4000g離心20min，棄掉3mL上清液；(重復(fù)加入5mL正己烷，用旋轉(zhuǎn)攪拌機(jī)攪拌15min，4000g離心20min)，棄掉5mL上清液，用氮?dú)獯蹈苫蚍胖猛L(fēng)櫥自然風(fēng)干；

步驟三，提取蛋白質(zhì)；

向剛才干燥的除脂樣品中加入3.8mL提取緩沖液(含50mM/L?Tris?base的2M尿素)和200μL變性劑(20％β-D-吡喃葡萄糖苷，用力搖動(dòng)樣品使混合物分解，用旋轉(zhuǎn)攪拌機(jī)混合60min，4000g離心30min，取上清液500μL到2mL的離心管中；

步驟四，還原二硫鍵；

每個(gè)樣品中加入10μL的還原劑(500mM?DDT)，攪拌器輕輕攪拌，60℃，1000轉(zhuǎn)/min孵育30min；

步驟五，阻斷半胱氨酸和其他巰基；

每個(gè)樣品中加入30μL的半胱氨酸阻斷劑(500mM?IAA)，攪拌器輕輕攪拌，室溫避光30min；

步驟六，胰蛋白酶消化；