[發明專利]膜性腎小球腎炎的新型生物標志物

在審

• 申請號: 202211262231.0
• 申請日: 2022-10-14
• 公開（公告）號: CN115980358A
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: R·斯塔爾;E·霍查;L·萊因哈德
• 申請（專利權）人: 歐蒙醫學實驗診斷股份公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 中國貿促會專利商標事務所有限公司 11038
• 代理人: 殷駿

本發明涉及Netrin?G1作為膜性腎小球腎炎(MGN)的生物標志物，特別是在用于診斷、預后和監測具有循環Netrin?G1自身抗體的患者的MGN的體外方法和試劑盒中使用包含多肽和Netrin?G1抗體的Netrin?G1抗原。

發明領域

本發明涉及膜性腎小球腎炎(MGN)的新型生物標志物，特別是例如存在于診斷為MGN的受試者中的自身抗體和抗原的生物標志物。本發明提供了用于MGN診斷、預后和監測的體外方法和試劑盒。

發明背景

膜性腎小球腎炎(MGN)是一種自身免疫性腎臟疾病，其特征在于蛋白尿，尿液中存在過量蛋白質。當循環性抗體結合腎臟腎小球基底膜的足細胞表面上的抗原時，MGN得以進展，這導致補體系統的激活、腎小球濾過屏障的破壞和蛋白尿的發展。數十年來，引發導致MGN的自身免疫反應的抗原仍然未知，并且該疾病的分子病理生理學無法表征。此外，不可能對MGN進行抗原特異性診斷。如果沒有免疫生物標志物作為診斷和疾病進展的標志物，則只能通過活組織檢查來診斷疾病。基于蛋白尿和血清肌酸標志物做出治療決定，所述標志物是一旦疾病進展并且發生可測量的損傷時發生的腎損傷的標志物。因此，難以使可能的療法適應疾病進展，因為沒有早期的生物標志物和表征疾病的方法。

最初的MGN靶抗原，磷脂酶A2受體1(PLA2R1)和血小板應答蛋白1型結構域蛋白7A(THSD7A)分別于2009年和2014年被發現。他們一起占MGN患者的約80％。這些致病抗原的發現使得能夠開發特異性診斷標志物，例如對于各抗原的腎活組織檢查的特異性染色和患者血液樣品中循環性抗體的檢測。在PLA2R1抗體相關MGN患者中，循環性自身抗體水平不僅可以預測對治療的反應，還能夠進行腎功能不全的預后。因此，可以基于其個體PLA2R1抗體水平調整這些患者的治療，并因此可以根據疾病進展和發病機理調整治療。

20％的MGN患者無法獲得靶向治療或生物標志物。因此，對這些患者存在相應的診斷、預后和靶向治療需求。輔助MGN治療的其它生物標志物的開發受到抗原分子特性的阻礙。自身抗體識別的PLA2R1和THSD7A中的表位是構象依賴性的，并且不能通過常規方法檢測，例如標準蛋白質印跡(Western?Blot)方法。

本發明人能夠開發對于MGN的新生物標志物，其可用于表征患者血液樣品中的MGN，以輔助診斷、監測疾病進展并實現靶向治療。

發明的目標和概述

本發明的目的是提供用于診斷和預后受試者中膜性腎小球腎炎(MGN)，特別是特發性膜性腎小球腎炎的有效方法。此外，本發明的目的是提供確定MGN受試者的治療效果和疾病進展的非侵入性方法。優選地，MGN是自身免疫MGN，更優選與抗NTNG1如抗NTNG1自身抗體的存在相關。另一個目標是提供和制備用于這種測定的裝置、測定和試劑。

令人驚訝的是，本發明人能夠鑒定膜性腎小球腎炎中的新型自身抗原。因此，本發明涉及Netrin?G1(NTNG1)作為膜性腎小球腎炎中的新型自身抗原的鑒定并提供使用NTNG1和NTNG1自身抗體作為生物標志物的方法。

本發明的第一方面涉及體外方法，其包括在從受試者獲得的生物樣品中檢測識別(優選特異性結合)Netrin?G1(NTNG1)多肽或其一種或多種抗NTNG1抗體結合片段的一種或多種自身抗體。

在一個實施方案中，體外方法還包括檢測生物樣品中NTNG1多肽或其一種或多種抗NTNG1抗體結合片段與抗NTNG1自身抗體之間形成的任何抗原-抗體復合物的步驟。

因此，在一個實施方案中，診斷受試者中膜性腎小球腎炎的體外方法包括以下步驟：(i)使從受試者獲得的生物樣品與NTNG1多肽或其一種或多種抗NTNG1抗體結合片段接觸，(ii)檢測生物樣品中NTNG1多肽或其一種或多種抗NTNG1抗體結合片段與抗NTNG1自身抗體之間形成的任何抗原-抗體復合物。

在一個實施方案中，檢測抗原-抗體復合物包括確定抗NTNG1自身抗體的存在。