[發明專利]一種反應板及多重核酸分子樣品平行測定裝置

在審

• 申請號: 202211260103.2
• 申請日: 2022-10-14
• 公開（公告）號: CN115449478A
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發明（設計）人: 許亮
• 申請（專利權）人: 上海晶鍇科技有限公司
• 主分類號: C12M1/38
• 分類號: C12M1/38;C12M1/36;C12M1/34;C12M1/00;C12Q1/6851;C12Q1/6844
• 代理公司: 上海灣谷知識產權代理事務所(普通合伙) 31289
• 代理人: 茆學光

本申請公開了一種反應板及多重核酸分子樣品平行測定裝置，反應板可同時對多種核酸分子進行平行實時定量檢測和/或存在檢測，通過一次加樣，在一個反應板上同時高通量的對十幾種到幾千種的核酸分子進行檢測和定量的技術，不需要過于復雜的引物設計，也不需要過于繁瑣的條件優化，探針也不需要多種熒光基團標記或者熒光編碼，從而在制備成本、開發速度、操作便利性和檢測目標分子通量上有很大的技術優勢。在多重核酸分子樣品平行測定裝置的配合下，可以實現多種核酸擴增反應，實現核酸檢測、基因診斷、基因序列分析、基因類型及多態性的分析、基因表達的分析，以及核酸篩查等生物技術領域，操作便利性，檢測范圍廣。

技術領域

本申請涉及核酸檢測技術領域，具體而言，涉及一種反應板及多重核酸分子樣品平行測定裝置。

背景技術

多重核酸擴增技術通常指的是多重PCR(Multiplex polymerase chainreaction，MPCR)擴增技術，但此發明的所述的核酸擴增技術不局限于PCR擴增，還包括聚合酶鏈式反應(PCR)，逆轉錄聚合酶反應(RT-PCR)，隨機引物擴增反應，各種恒溫擴增反應，連接酶鏈反應(LCR)，轉錄介導擴增反應(TMA)等，是指通過一次核酸擴增反應同時對多個核酸靶標進行擴增，結合一定的檢測手段對擴增產物進行檢測從而實現對多個靶標進行診斷的技術。多重核酸擴增技術具有高效率、高通量、低成本的特性而被深入研究，并且被廣泛應用于科學研究和疾病診斷等領域。

多重核酸擴增技術的優勢在于它的高效性，通過一次擴增反應即可實現對多種病原體，或多種基因型進行檢測和鑒別，檢測效率大大增加，并提供更多檢測信息。多重核酸擴增技術具有廣泛的應用前景，但是仍然存在許多影響多重擴增與檢測效果的因素，其中擴增效率的一致性是最大的難題，檢測的重數越多，擴增效率和一致性往往越低。針對多重擴增效率一致性的問題，傳統單管多靶標擴增的方式要通過不斷優化引物的設計，以及不斷優化反應體系中緩沖液、酶、引物、探針等的用量，確保每一重的擴增效率保持一致，然而隨著檢測重數的增加，引物間相互影響的概率也高，形成二聚體甚至多聚體的可能性也大幅上升，輕則導致非特異性擴增的出現，靶標擴增效率下降，檢測靈敏度和特異性降低，重則導致非特異性擴增占據主導，靶標擴增失敗，造成假陽性和/或假陰性，影響檢測準確性。這使得多重擴增的多重通量受到極大的限制。

而現實中的核酸檢測往往需要多種基因類型的檢測判斷或者定量，以獲得更豐富的核酸信息。比如引起感染的病原體種類和亞型的判斷，大多情況下只檢測是不是某種病原體感染是遠遠不夠的，更重要的是篩查出所感染的是哪種病原體，甚至是哪種病原體的亞型，而要篩查的種類和亞型就可能有十幾種，甚至是幾十種之多。還有腫瘤耐藥性的突變，例如EGFR基因突變可能造成靶向藥物的失效，但EGFR基因可能的突變位點有十幾個。而其他靶向藥物的突變也各有各的不同，要想能篩查出哪種靶向藥合適患者的治療，幾十種突變的篩查是避免不了的。可想而知，高重的(大于10重)核酸擴增檢測技術將能解決臨床診斷的很多問題。而且，臨床診斷的應用還要考慮成本和操作的便利性。

除了多重性問題，經常還需要面臨DNA和RNA同時檢測的問題。比如引起感染的病毒可能是DNA病毒也可能是RNA病毒，引起腫瘤靶向藥物是否耐藥可能是基因的突變也可能是RNA表達量的變化，同樣引起細菌耐藥的原因可能是DNA的突變也可能是RNA表達量的變化等。所以如果能同時檢測DNA和RNA，將使檢測技術的功能更加強大，同時操作更加便利。

為解決多重擴增中引物、探針間的相互影響，將多個反應進行物理分割是解決的方式之一，比如利用微滴技術，或者微流控技術等技術分割。但微滴技術和微流控技術往往成本較高，操作難度也大，又不利于大規模制造加工，產業化難度較高。

發明內容

本申請的主要目的在于提供一種反應板及多重核酸分子樣品平行測定裝置，以解決目前的問題。

為了實現上述目的，本申請提供了如下技術：

本申請第一方面提供一種反應板，適用于對多種核酸分子進行平行實時定量檢測和/或存在檢測，包括，