[發(fā)明專利]一種大腸桿菌表面展示系統(tǒng)的構(gòu)建方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211258645.6
• 申請(qǐng)日: 2022-10-14
• 公開（公告）號(hào): CN116064628A
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任磊;王孝宇;陳昊翔;王苗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12N15/62;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 廈門市首創(chuàng)君合專利事務(wù)所有限公司 35204
• 代理人: 游學(xué)明

本發(fā)明公開一種大腸桿菌表面展示系統(tǒng)的構(gòu)建方法，涉及合成生物學(xué)領(lǐng)域。本發(fā)明包括如下的步驟：1)構(gòu)建第一質(zhì)粒，所述的第一質(zhì)粒具有SpyTag和待表達(dá)蛋白的融合蛋白基因；2)構(gòu)建第二質(zhì)粒，所述的第二質(zhì)粒具有INPNC和SpyCatcher基因；3)將第一質(zhì)粒和第二質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入同一大腸桿菌，獲得表面展示待表達(dá)蛋白的工程菌。本發(fā)明在大腸桿菌中將冰核蛋白INP與SpyCatcher蛋白融合表達(dá)，實(shí)現(xiàn)對(duì)含有SpyTag短肽標(biāo)簽的其他所有蛋白表面展示。因此，本發(fā)明為不同蛋白的表面展示提供了一種便捷通用的方法，實(shí)現(xiàn)表面展示平臺(tái)的搭建。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，同時(shí)涉及合成生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及開發(fā)一種通用大腸桿菌表面展示策略。

背景技術(shù)

細(xì)菌的表面展示可以在細(xì)胞表面上呈遞蛋白質(zhì)或者多肽，目前廣泛應(yīng)用于全細(xì)胞傳感器、原位催化劑、藥物載體等領(lǐng)域。表面展示策略的原位酶促反應(yīng)可以有效避免一些胞內(nèi)因素影響，同時(shí)通過合成生物學(xué)方法表面展示的目標(biāo)蛋白可以自發(fā)隨著細(xì)菌擴(kuò)增而擴(kuò)增，無需二次操作。然而，直接表面展示系統(tǒng)若要展示不同的蛋白，需要重新設(shè)計(jì)質(zhì)粒并交給公司合成，成本較高；同時(shí)直接將錨定蛋白和被錨定蛋白融合很容易對(duì)目標(biāo)蛋白活性造成影響。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的，在于提供一種表面展示不同目的蛋白的通用策略，為搭建工程化表面展示平臺(tái)提供方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種大腸桿菌表面展示系統(tǒng)的構(gòu)建方法，包括如下步驟：

1)構(gòu)建第一質(zhì)粒，所述的第一質(zhì)粒具有SpyTag和待表達(dá)蛋白的融合蛋白基因；

2)構(gòu)建第二質(zhì)粒，所述的第二質(zhì)粒具有INPNC和SpyCatcher基因；

3)將第一質(zhì)粒和第二質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入大腸桿菌，獲得表面展示待表達(dá)蛋白的工程菌。

進(jìn)一步，所述第一質(zhì)粒為表達(dá)SpyTag-待表達(dá)蛋白的融合蛋白基因插入質(zhì)粒pSB1C3而得。

進(jìn)一步，所述的第二質(zhì)粒為INPNC-SpyCatcher基因插入質(zhì)粒pSB3K3而得。

進(jìn)一步，所述第一質(zhì)粒和第二質(zhì)粒均具有常啟動(dòng)子。

進(jìn)一步，所述的大腸桿菌為大腸桿菌BL21(DE3)。

進(jìn)一步，所述第二質(zhì)粒的序列為SEQ?ID?NO：1。

進(jìn)一步，所述的待表達(dá)蛋白為eGFP,HisTag-SpyTag-eGFP?CDS序列見SEQ?ID?NO：2。

進(jìn)一步，還包括步驟4)工程菌培育，待表達(dá)蛋白被表達(dá)。

進(jìn)一步，步驟4)中，無需誘導(dǎo)即可表達(dá)蛋白。

進(jìn)一步，步驟4)中，通過菌體表面是否產(chǎn)生綠色熒光來判斷異肽鍵形成。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：